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首页> 中文期刊> 《中华妇产科杂志》 >HER-2小分子干扰RNA对卵巢上皮性癌细胞侵袭和趋化能力的影响

HER-2小分子干扰RNA对卵巢上皮性癌细胞侵袭和趋化能力的影响

         
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目的探讨 HER-2小分子干扰 RNA（siRNA）对卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞侵袭和趋化能力的影响。方法选用已知的干扰磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）的特异性位点作为阳性对照,采用蛋白印迹法检测卵巢癌细胞株 SKOV3细胞 GAPDH 蛋白和 HER-2蛋白的表达水平,以吸光度（A）值表示。然后在 HER-2基因的编码区内根据干涉位点的筛选原则,选择 HER-2 siRNA Ⅰ、HER-2siRNAⅡ、HER-2 siRNAⅢ3段靶序列,体外转录合成 HER-2 siRNA。实验分为4组:空白对照组、脂质体组、非特异性转染组（非特异性 siRNAⅢ）、特异性转染组（HER-2 siRNAⅢ）,以β肌动蛋白（β-actin）作为内参照,用荧光实时定量 PCR 和蛋白印迹法检测转染前后 SKOV3细胞 HER-2 mRNA 和蛋白表达的变化;细胞侵袭实验和细胞趋化实验检测转染前后 SKOV3细胞体外侵袭和趋化能力的变化。结果 GAPDH siRNA 能明显抑制 SKOV3细胞内源性 GAPDH 蛋白的表达,空白对照及加入不同剂量（0.5、1.0、1.5、2.0μg）的 GAPDH siRNA 转染 SKOV3细胞后,其 GAPDH 蛋白的表达水平分别为0.6855±0.0259、0.5698±0.0275、0.4542±0.0296、0.3341±0.0178及0.1816±0.0180,各剂量间比较,差异有统计学意义（F=198.126,P＜0.01）。HER-2 siRNAⅡ、HER-2 siRNAⅢ均有抑制 HER-2蛋白表达的作用,HER-2 siRNAⅡ、HER-2 siRNAⅢ转染后 SKOV3细胞中 HER-2蛋白的相对表达水平（分别为0.2162±0.1589、0.1562±0.0067）,分别与空白对照组、非特异性转染组及转染 HER-2siRNA Ⅰ的 SKOV3细胞（分别为0.3674±0.0350、0.3839±0.0188、0.3532±0.0197）比较,差异均有统计学意义（F=69.461,P＜0.01）。不同剂量（0.5、1.0、1.5、2.0μg）的 HER-2 siRNAⅢ转染后,SKOV3细胞中 HER-2 mRNA 的相对表达水平比较,差异有统计学意义（F=174.53,P＜0.01）;HER-2siRNAⅢ转染后第1、3、6天,SKOV3细胞中 HER-2 mRNA 的相对表达水平分别为0.0506±0.0017、0.0266±0.0011及0.0154±0.0020,不同时间点比较,HER-2 mRNA 的相对表达水平呈明显下降趋势（P＜0.01）;特异性转染组 SKOV3细胞的侵袭和趋化能力均明显低于非特异性转染组及空白对照组,差异均有统计学意义（F=53.707,P＜0.01;F=11.361,P＜0.01）。结论 HER-2 siRNA 对卵巢癌细胞 HER-2基因的抑制作用呈时间及剂量依赖性,HER-2 siRNA 能显著抑制细胞侵袭和趋化能力,这为卵巢癌的基因治疗提供了一种新策略。

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