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高表达多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子对糖基化终产物诱导下视网膜Müller细胞凋亡的影响

         
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目的 高表达多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子（PSF）对糖基化终产物（AGEs）诱导下视网膜Müller细胞凋亡的影响。方法 实验研究。体外培养的人Müller细胞分为正常细胞组（N组）、空白对照组（N+AGEs组）、空载体对照组（Vec+AGEs组）及PSF高表达组（PSF+AGEs组）。N组为常规培养的Müller细胞；N+AGEs组仅做转染处理并联合AGEs诱导；Vec+AGEs组、PSF+AGEs组利用转染试剂脂质体2000分别将增强型绿色荧光蛋白（pEGFP）空载体、pEGFP-PSF真核表达质粒导入Müller细胞并联合AGEs诱导。细胞转染24 h后应用AGEs （150 μg/ml）诱导72 h,采用HE、Hoechst 33258染色观察各组细胞形态；分别采用MTT比色法、ELISA细胞凋亡试剂盒及2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯法检测N+AGEs组、Vec+AGEs组、PSF+AGEs组细胞生存力、细胞凋亡值及细胞内ROS水平。结果 N组细胞形态饱满,胞浆染色均一；N+AGEs组、Vec+ AGEs组细胞体积缩小,胞质致密浓缩、嗜酸性染色增强；PSF+AGEs组细胞形态尚饱满,胞浆染色较均匀,胞核染色均一。N+AGEs组、Vec+AGEs组、PSF+AGEs组细胞生存力分别为0.42±0.11、0.35±0.12、0.68± 0.12；细胞凋亡值分别为1.08±0.16、0.96±0.20、0.44±0.08；细胞内ROS水平分别为28 833.67±3 550.06、28 356.67±4 854.81、18 616.00±3 382.54。与N+AGEs组、Vec+AGEs组比较,PSF+AGEs组细胞生存力明显提高（F=20.65 ,P=0.000 ）,细胞凋亡值（F=43.43 ,P=0.000）及细胞内ROS水平（F=18.86,P=0.000）明显降低,差异均有统计学意义。结论 高表达PSF通过抑制ROS产生来缓解AGEs诱导下人Müller细胞凋亡,从而发挥对Müller细胞的保护作用。

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