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内耳相关基础研究专辑基于聚酰胺胺的非病毒载体携带Math1基因进行体外基因转导的有效性和安全性评价

         
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摘要

Objective To develop a novel non-viral gene vector based on PAMAM dendrimers that is able to transduce the Math1 gene, and to evaluate its efficiency and safety. Methods PAMAM was modified by cyclodextrin with different weight ratios (1:2, 1:1,4:1 or 8:1) after activation at 60 degree for 6, 12, 24 or 48 hours. Polyplex was formed by mixing PAMAM solutions with plasmid solution containing pRK5-Mathl-EGFP of different N/P ratios (1/1, 2/ 1, 5/1 or 10/1). Transduction was performed using HEK-239T cells under non-serum conditions. The efficiency of transduction was evaluated using percentage of EGFP positive cells, while the safety was estimated using MIT. Results The maximum transduction efficiency (38.14 ± 2.85%) was achieved, with a 68.86 ± 3.44% viability, when vectors were heated for 24 hours, with a 1 : 1 PAMAM : CD ratio and 5/1 N/P ratio. Conclusion We have developed a PAMAM dendrimers -based non-viral gene vector, which is able to efficiently and safely transduce the Math1 gene in vitro. This vector may provide a new powerful tool of gene therapy for deafness.%目的 研发一种可用于携带Mathl基因进行基因转导的基于聚酰胺胺树枝状聚合物(PAMAM Dendrimers,PAMAM)的非病毒载体,对其转导效率和安全性进行评价,为进一步在体基因治疗奠定必要的实验基础和理论依据.方法 PAMAM(7代)通过加热活化和环糊精(Cyclodextrin,CD)表面修饰后,与pRK5-Math1-EGFP 质粒在不同氮磷比(N/P)的情况下,浮配形成基因-载体复合物,在无血清培养条件下,对HEK-293T细胞系进行体外基因转导,对其转导效率和安全性进行评价.加热活化温度设定为60℃,时间分别为:0、6、12、24、48小时；聚酰胺胺树枝状聚合物/环糊精质量比(PAMAM/CD)分别为:(1/2,1/1,4/1,8/1和无CD)；N/P分别为:1/1,2/1,5/1和10/1.通过荧光倒置显微镜观察EGFP阳性细胞并计算百分比的方法评价基因转导有效率,通过标准MTT实验评价其安全性.结果 通过60℃加热活化24小时、质量比为1/1进行环糊精表面修饰后获得的基于PAMAM的非病毒基因载体,携带pRK5-Math 1-EGFP质粒进行基因转导的效率最高,达到38.14±2.85％,同时其细胞存活率达到68.86±3.44％.结论 我们获得了一种基于PAMAM的非病毒基因载体,可高效、安全地携带Math1进行基因转导,为其下一步进行在体基因转导研究奠定了必要的实验基础,有望未来应用于临床的聋病基因治疗.

著录项

  • 来源
    《中华耳科学杂志》 |2011年第3期|258-263|共6页
  • 作者

    吴南; 陈志婷; 李敏; 刘会占; 任丽丽; 吴雁; 杨伟炎; 杨仕明;

  • 作者单位

    解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科医院 解放军耳鼻咽喉研究所 北京 100853;

    解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科医院 解放军耳鼻咽喉研究所 北京 100853;

    兰州大学第一医院耳鼻咽喉头颈外科 兰州 730001;

    国家纳米科学中心 北京100190;

    解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科医院 解放军耳鼻咽喉研究所 北京 100853;

    解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科医院 解放军耳鼻咽喉研究所 北京 100853;

    国家纳米科学中心 北京100190;

    解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科医院 解放军耳鼻咽喉研究所 北京 100853;

    解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科医院 解放军耳鼻咽喉研究所 北京 100853;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 R349.83;
  • 关键词

    基因转导; 聚酰胺胺树枝状聚合物; Math1; 活化; 环糊精修饰;

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