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pNTAP-PRAK真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达

         

摘要

目的: 构建pNTAP-PRAK真核表达质粒,并建立其稳定表达的HEK293细胞系.方法: 将人的PRAK亚克隆至串联亲和纯化(tandem affinity purification, TAP)载体pNTAP质粒上,构建成重组质粒pNTAP-PRAK,转化该重组质粒至感受态大肠杆菌DH5α,阳性克隆进行PCR、酶切及DNA测序验证正确后,利用PolyFect脂质体介导将其转染至HEK293细胞中,再通过G418筛选建立稳定表达TAP tag-PRAK融合蛋白的HEK293细胞系;利用Western blotting和细胞免疫荧光标记法检测融合蛋白TAP tag-PRAK的表达及细胞内定位情况.结果: 重组真核表达载体构建正确,该重组质粒能在HEK293细胞中稳定表达,表达产物TAP tag-PRAK主要分布在核内.结论: 成功构建pNTAP-PRAK真核表达载体并建立了其稳定表达的HEK293细胞系,TAP标签未对PRAK定位产生明显影响.

著录项

  • 来源
    《中国病理生理杂志》 |2010年第9期|1813-1817|共5页
  • 作者单位

    南方医科大学病理生理学教研室和广东省蛋白质组学重点实验室;

    暨南大学医学院病理生理学系,广东,广州,510632;

    南方医科大学病理生理学教研室和广东省蛋白质组学重点实验室;

    南方医科大学病理生理学教研室和广东省蛋白质组学重点实验室;

    南方医院呼吸科,广东,广州,510515;

    南方医科大学病理生理学教研室和广东省蛋白质组学重点实验室;

    南方医科大学病理生理学教研室和广东省蛋白质组学重点实验室;

    南方医科大学病理生理学教研室和广东省蛋白质组学重点实验室;

    南方医科大学病理生理学教研室和广东省蛋白质组学重点实验室;

    南方医科大学病理生理学教研室和广东省蛋白质组学重点实验室;

    南方医科大学病理生理学教研室和广东省蛋白质组学重点实验室;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 基因工程(遗传工程);
  • 关键词

    p38调节活化蛋白激酶; 克隆,分子; 基因表达;

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