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人CDK2基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

         

摘要

目的:构建人细胞周期素依赖蛋白激酶2(CDK2)基因RNA干扰慢病毒载体.方法:利用Invitrogen公司在线软件设计人CDK2 (NM001798) shRNA序列,退火形成ds oligo后克隆到pENTRTM/U6载体的黏性末端,测序,再与慢病毒载体重组,测序鉴定,在脂质体的介导下将慢病毒的包装混合物和CDK2基因重组慢病毒载体转染293FT细胞,包装成病毒后,收集细胞培养上清液,测定病毒滴度.结果:测序证实pENTRTM/U6-CDK2-shRNA为阳性克隆,与慢病毒载体重组后测序结果显示也为阳性克隆,CDK2基因重组慢病毒载体传染293FT细胞后48h,细胞培养上清液,病毒的滴度为6×108TU/L.结论:成功构建人CDK2基因RNAi慢病毒载体,为研究CDK2在自身免疫病中的应用提供了稳定的转染细胞载体.

著录项

  • 来源
    《中国病理生理杂志》 |2008年第6期|1246-1248|共3页
  • 作者单位

    南方医科大学南方医院检验医学中心,广东,广州510515;

    广东省中医院检验科,广东,广州510120;

    南方医科大学南方医院检验医学中心,广东,广州510515;

    南方医科大学南方医院检验医学中心,广东,广州510515;

    广东省中医院检验科,广东,广州510120;

    南方医科大学南方医院检验医学中心,广东,广州510515;

    南方医科大学南方医院检验医学中心,广东,广州510515;

    广东省中医院检验科,广东,广州510120;

    广东省中医院检验科,广东,广州510120;

    广东省中医院检验科,广东,广州510120;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 病理生理学;
  • 关键词

    基因,CDK2; RNA干扰; 慢病毒载体;

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