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黏附素5胞外区克隆、转染及抗人乳腺癌细胞生长的研究

         

摘要

目的:克隆和转染黏附素5胞外区,并研究其对人乳腺癌MDA-MB435细胞株生长的影响.方法:RT-PCR技术克隆黏附素5胞外区(称为CED1-4),将其插入pMSCV质粒载体,在大肠杆菌XL-blue扩增,提取和纯化pMSCV-CED1-4,酶切、电泳和测序检测CED1-4序列.CED1-4基因转染MDA-MB435细胞株,RT-PCR和Western blotting检测MDA-MB435细胞表达CED1-4.细胞增殖实验和乳腺癌裸小鼠致瘤实验检测CED1-4对MDA-MB435细胞体内外生长的影响.结果:构建了重组体pMSCV-CED1-4,电泳显示CED1-4条带在 1 636 bp-1 018 bp区间,测序显示CED1-4基因长1 452 bp,编码484氨基酸.经PCR和Western blotting证实,CED1-4基因转染的MDA-MB435细胞在mRNA和蛋白质水平表达CED1-4.细胞增殖实验结果表明, 实验组MDA-MB435细胞增殖低于实验对照组和空白对照组(P<0.05).乳腺癌裸小鼠致瘤实验显示,实验组移植瘤平均体积和重量低于实验对照组和空白对照组(P<0.05).结论:黏附素5胞外区CED1-4能在体内外抑制人乳腺癌MDA-MB435细胞株的生长.

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