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艾洛替尼耐药的卵巢癌SKOV3细胞系的建立及其耐药特性

         

摘要

目的 通过体外建立艾洛替尼(Erl)耐药的人浆液性卵巢癌细胞系SKOV3/Erl,并探讨其耐药机制,为卵巢癌靶向性治疗的耐药性研究提供细胞模型及依据.方法 采用逐步递增联合大剂量冲击法诱导细胞,取对数生长期的SKOV3细胞,从Erl 1 μmol·L-1开始处理,以Erl 2,4,8,16和 25 μmol·L-1反复换液传代,最终维持浓度为10 μmol·L-1,共诱导10个月.取SKOV3和SKOV3/Er1细胞,加入不同浓度艾洛替尼、紫杉醇、米托蒽醌、表柔比星、拓扑替康、长春新碱和甲氨蝶呤等药物,作用72 h,磺酰罗丹明B染色法检测耐药倍数.流式细胞术检测SKOV3细胞和SKOV3/Er1细胞的细胞周期.Western印迹法检测Erl刺激对敏感和耐药细胞中表皮生长因子受体(EGFR)相关信号通路产生的变化;流式细胞术检测SKOV3/Er1细胞表面ATP结合盒(ABC)转运蛋白中P糖蛋白(Pgp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)的表达以及Toll样受体4(TLR4)的表达;检测脂多糖(LPS)刺激对紫杉醇耐受的SKOV3/Erl细胞的敏感度.结果 Erl对SKOV3细胞的IC50为(9.54±1.04)μmol·L-1,而对SKOV3/Erl细胞的IC50为(21.63±1.05)μmol·L-1,耐药倍数约为2.26,诱导成功的SKOV3/Erl对紫杉醇、长春新碱、米托蒽醌和甲氨蝶呤的耐药倍数均在3倍以上.与SKOV3细胞相比,SKOV3/Erl 细胞G0/G1期比例上升,S期比例下降,G2/M期几乎无变化.Erl刺激后,与SKOV3细胞相比,SKOV3/Erl细胞中p-HER1,p-ERK与p-AKT水平上调.SKOV3/Erl细胞膜上Pgp,BCRP和MRP1表达有微弱上调,而TLR4显著上调;脂多糖可强烈刺激SKOV3/Erl细胞增殖,并且对紫杉醇杀伤起到保护作用,而亲本细胞则相对不敏感.结论 成功建立了对Erl耐受的人卵巢癌耐药细胞SKOV3/Erl.其表现出的多药耐药机制可能与TLR4蛋白表达上调有关.

著录项

  • 来源
    《中国药理学与毒理学杂志》 |2013年第2期|268-274|共7页
  • 作者单位

    军事医学科学院基础医学研究所免疫学研究室;

    北京;

    100850;

    南开大学医学院;

    天津;

    300071;

    解放军总医院妇产科;

    北京;

    100853;

    军事医学科学院基础医学研究所免疫学研究室;

    北京;

    100850;

    军事医学科学院基础医学研究所免疫学研究室;

    北京;

    100850;

    军事医学科学院基础医学研究所免疫学研究室;

    北京;

    100850;

    军事医学科学院基础医学研究所免疫学研究室;

    北京;

    100850;

    军事医学科学院基础医学研究所免疫学研究室;

    北京;

    100850;

    南开大学医学院;

    天津;

    300071解放军总医院妇产科;

    北京;

    100853;

    军事医学科学院基础医学研究所免疫学研究室;

    北京;

    100850;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 癌细胞生物学;
  • 关键词

    艾洛替尼; 卵巢癌; 耐药; 酪氨酸激酶抑制剂;

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