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人载脂蛋白A5多克隆抗体的制备和组织分布

         

摘要

目的制备人载脂蛋白A5(ApoA5)重组蛋白及其多克隆抗体,利用该抗体检测ApoA5在体内的组织分布情况,为进一步研究该分子的功能和血清水平等提供条件。方法2004年3月至6月,中南大学湘雅二医院心内科通过聚合酶链反应(PCR)和基因重组技术,构建了含ApoA5编码基因的表达载体,表达了His-ApoA5融合蛋白,免疫新西兰大白兔制备了抗ApoA5多抗;经酶联免疫吸附分析技术(ELISA)、Western-blot等方法进行鉴定,并初步用于临床组织标本的检测,观察ApoA5在体内的表达。结果所表达的His-ApoA5融合蛋白相对分子质量约为40ku),以其为抗原制备的ApoA5特异性抗血清具有良好的免疫反应性、较高的效价和特异性。Western印迹表明,ApoA5存在于人血清和肝组织中(无论正常血脂和高血脂者),其他组织中(心、血管、小肠、脾、肺)未见到阳性结果。结论ApoA5存在人血清中,ApoA5在肝内表达对于血脂在肝内代谢可能具有重要的意义。

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