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蓝舌病病毒8型实时荧光RT-RAA检测方法的建立及应用

         

摘要

为建立蓝舌病病毒8型(BTV-8)的快速检测方法,本实验根据GenBank中BTV-8 VP2基因保守序列,设计并合成特异性引物和探针,经各反应条件的优化,建立BTV-8实时荧光重组酶介导扩增(RT-RAA)检测方法。结果显示,该方法仅对BTV-8呈阳性反应,对BTV其他血清型、小反刍兽疫病毒、牛病毒性腹泻病毒、伪狂犬病病毒和口蹄疫病毒均为阴性结果,特异性强;对重组质粒标准品的最低检测限为20拷贝/μL,敏感性与已报道的BTV-8荧光定量RT-PCR检测方法相同;批内和批间变异系数均小于5%,重复性好。对146份临床血清样品和4份盲样进行检测,结果与已报道的荧光定量RT-PCR方法检测结果一致,其中1份盲样检测结果为阳性其余样品均为阴性,二者符合率达100%。本研究建立的BTV-8实时荧光RT-RAA检测方法具有特异性强、灵敏度高、快速、稳定性好的优点,可以应用于蓝舌病流行病学调查和BTV感染的早期监测。

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