绵羊肺源大肠杆菌cyaA基因缺失对小鼠肺泡巨噬细胞感染的影响

操义恒; 王子杰; 王巧梅; 党士荣; 张丽媛; 马雪; 张乾义; 周霞; 黄新; 张星星; 吴桐忠; 钟发钢

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为研究cyaA基因编码的腺苷酸环化酶(AC)在绵羊肺源大肠杆菌XJ10感染小鼠肺泡巨噬细胞(MH-S)中的作用,本研究以绵羊肺源大肠杆菌XJ10野毒株(XJ10WT)为对照,通过荧光定量PCR检测XJ10 cyaA基因缺失株(XJ10ΔcyaA)在感染MH-S细胞过程中与黏附侵袭相关的motA、crl、fimH、pap基因的m RNA转录水平,结果显示,与XJ10WT相比,XJ10ΔcyaA在感染MH-S细胞过程中与黏附侵袭相关的motA、crl、fimH、pap基因的m RNA转录水平在感染后0和6 h时均极显著降低(P<0.001),crl和pap基因的m RNA转录水平分别在2 h和12 h时均极显著上调(P<0.001)。进一步通过吉姆萨染色观察XJ10WT和XJ10ΔcyaA黏附MH-S细胞情况,采用细胞和细菌共培养方式分析XJ10ΔcyaA对MH-S细胞的黏附及侵袭能力,并通过CCK-8法分析细菌对MH-S细胞增殖的抑制情况。结果显示,XJ10ΔcyaA和XJ10WT在感染后3 h黏附MH-S细胞的活菌数量达峰值并持续至5 h,随后逐渐下降,在感染后1 h~5 h的时间段内,XJ10ΔcyaA黏附MH-S细胞的活菌数量均极显著低于XJ10WT(P<0.001)。XJ10ΔcyaA和XJ10WT侵袭MH-S细胞的活菌数量随着感染时间的延长逐渐升高,5 h时达到峰值,后持续下降,XJ10ΔcyaA在感染后1 h~10 h侵袭MH-S细胞的活菌数量均显著或极显著低于XJ10WT。在感染MH-S细胞后的3 h~6 h,XJ10ΔcyaA对细胞增殖的抑制率均极显著低于XJ10WT(P<0.001)。上述结果首次表明,cyaA基因表达的AC可以显著上调绵羊肺源E.coli与黏附侵袭相关基因的转录水平,并参与绵羊肺源E.coli对MH-S细胞的黏附与侵袭,抑制MH-S细胞增殖。本研究为绵羊肺源E.coli致病机制的研究奠定了基础。

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来源
《中国预防兽医学报》 |2023年第3期|295-301|共7页
作者
操义恒; 王子杰; 王巧梅; 党士荣; 张丽媛; 马雪; 张乾义; 周霞; 黄新; 张星星; 吴桐忠; 钟发钢;
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作者单位

石河子大学动物科技学院;

新疆农垦科学院省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室;

中国兽医药品监察所;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类细菌病;
关键词
绵羊肺源大肠杆菌; cyaA基因; 小鼠肺泡巨噬细胞; 黏附及侵袭; 细胞增殖抑制率;

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