内弯宫脂线虫环介导等温扩增联合横向流动试纸条检测方法的建立

乔艳; 周前进; 李孝军; 陈炯

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为建立内弯宫脂线虫(H.aduncum)的LAMP-LFD快速检测技术,本研究将环介导等温扩增技术(LAMP)与横向流动试纸条(LFD)的检测方法结合,以内弯宫脂线虫核糖体DNA (rDNA)的内转录间隔区(ITS)序列为检测靶标,设计了3对特异性引物(其中上游内引物由生物素标记)进行LAMP扩增反应,产物与经异硫氰酸荧光素(FITC)标记的探针杂交,在LFD上完成结果显示.结果表明,LAMP-LFD方法能够特异性地检测内弯宫脂线虫,对简单异尖线虫等8种其它常见鱼类寄生蠕虫检测呈阴性.对含有内弯宫脂线虫rDNA-ITS2序列的重组质粒的检测灵敏度为1.4×102拷贝/μL,为常规PCR检测方法的100倍;对内弯宫脂线虫第三期幼虫,单虫检测灵敏度为单条虫体基因组DNA的10-6倍.优化后LAMP检测时程仅40 min.对实际样品的检测结果表明,LAMP-LFD方法检测内弯宫脂线虫与PCR结合测序方法获得的结果一致.因此,利用LAMP-LFD能够特异、灵敏、高效地检测出内弯宫脂线虫,具有在该线虫的检验检疫中良好的应用前景.

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来源
《中国预防兽医学报》 |2017年第2期|137-142|共6页
作者
乔艳; 周前进; 李孝军; 陈炯;
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作者单位

宁波大学生物技术系,浙江宁波315211;

宁波大学生物技术系,浙江宁波315211;

舟山出入境检验检疫局,浙江舟山316000;

宁波大学生物技术系,浙江宁波315211;

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正文语种 chi
中图分类家畜寄生虫学;
关键词
内弯宫脂线虫; 环介导等温扩增; 横向流动试纸条; 检测;

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