鸭坦布苏病毒一步法RT-PCR与荧光定量RT-PCR检测方法的建立

王建昌; 王金凤; 袁万哲; 刘立兵

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鸭坦布苏病毒一步法RT-PCR与荧光定量RT-PCR检测方法的建立

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为建立鸭坦布苏病毒(DTMUV)的检测方法,本研究根据GenBank中登录的DTMUV E基因保守区域设计引物和探针,建立了检测DTMUV的一步法RT-PCR和荧光定量RT-PCR方法,并比较了两种方法的敏感性和特异性.结果显示,荧光定量RT-PCR标准曲线的相关系数(R2)为0.999,DTMUV RNA在102拷贝/μL ～107拷贝/μL范围内与Ct值呈现良好的线性关系;两种方法均仅对DTMUV RNA具有特异性扩增,而对其他常见鸭病原核酸的扩增均为阴性,具有较强的特异性;一步法RT-PCR对鸭胚纯培养病毒RNA的检测下限为103拷贝/μL,而荧光定量RT-PCR的检测下限为102拷贝/μL;重复性试验的变异系数均小于1.5％.对20份模拟临床样品的检测结果表明,一步法RT-PCR的阳性率为75 ％(15/20),而荧光定量RT-PCR的阳性率为90％(18/20).本研究表明所建立的DTMUV荧光定量RT-PCR特异性强、重复性好、敏感性更高,更适用于DTMUV的临床诊断和流行病学调查.

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来源
《中国预防兽医学报》 |2016年第8期|629-633|共5页
作者
王建昌; 王金凤; 袁万哲; 刘立兵;
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作者单位

河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心,河北石家庄050051;

河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心,河北石家庄050051;

河北农业大学动物医学院,河北保定071001;

河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心,河北石家庄050051;

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正文语种 chi
中图分类家畜病毒学;
关键词
鸭坦布苏病毒; 荧光定量RT-PCR; 一步法RT-PCR; E基因;

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