猪源抗体基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

王香玲; 柴政; 田华彬; 符芳; 姜福成; 郑楠; 张雪云; 郭佃磊; 李曦

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猪源抗体基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

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为制备原核表达猪源重组抗体,本研究利用FITC标记的山羊抗猪IgG标记猪外周血淋巴细胞,通过流式细胞术筛选出IgG+B细胞.以提取的IgG+B细胞总RNA反转录制备的cDNA为模板,通过PCR扩增猪抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL),将扩增的可变区与本实验室前期克隆的猪源抗体恒定区编码序列通过Linker序列[(Gly)4Ser]3连接,构建全长的猪源抗体编码基因(H-linker-L).将该基因克隆于原核表达载体pET-28a中进行原核表达及纯化.Western blot鉴定结果表明,该重组蛋白能够被兔抗猪IgG-HRP所识别,表明构建的重组抗体为猪源抗体.本研究为特异性猪源抗体的制备以及猪病的防制奠定了基础.

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来源
《中国预防兽医学报》 |2015年第9期|712-715|共4页
作者
王香玲; 柴政; 田华彬; 符芳; 姜福成; 郑楠; 张雪云; 郭佃磊; 李曦;
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作者单位

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室,黑龙江哈尔滨150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室,黑龙江哈尔滨150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室,黑龙江哈尔滨150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室,黑龙江哈尔滨150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室,黑龙江哈尔滨150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室,黑龙江哈尔滨150001;

哈尔滨师范大学生命科学与技术学院,黑龙江哈尔滨150025;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室,黑龙江哈尔滨150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室,黑龙江哈尔滨150001;

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正文语种 chi
中图分类家畜免疫学;
关键词
B淋巴细胞; 抗体可变区; 猪源抗体;

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