表达H5亚型禽流感病毒HA蛋白的重组禽痘病毒的构建

焦同路; 陈化兰; 王靖飞; 赵双成; 王世达; 常晓飞; 田石; 柳金雄; 李雁冰; 姜永萍

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为构建表达H5亚型禽流感病毒(AIV)A/Duck/Anhui/1/06(H5N1)(简称AH/06)HA蛋白的重组禽痘病毒,本研究利用感染-转染的方法通过转移载体pSY681-gfp-gpt将AIV株AH/06的HA基因同源重组到禽痘病毒(FPV)中,并利用gfp和gpt双重筛选标记在鸡胚成纤维细胞中经过多轮筛选,得到纯化的重组禽痘病毒(rFPV-gfp-gpt-AHHA).通过PCR、序列测定和western blot的方法对rFPV-gfp-gpt-AHHA进行鉴定和抗原活性分析.结果表明AH/06的HA基因稳定的重组到rFPV-gfp-gpt-AHHA中,其表达的HA蛋白能够与AH/06的阳性血清反应,显示出了良好的抗原性.同时病毒的生长曲线也显示外源HA基因的插入并没有影响亲本病毒的复制.这些结果为进一步的免疫效力研究奠定了基础.%To construct recombinant fowlpox virus (FPV) expressing HA protein of H5 subtype avian influenza virus (AIV), the HA gene from ATV A/Duck/Anhui/1/O6(H5N1) was amplified by PCR and inserted into the transfer vector pSY681-gfp-gpt of FPV. The recombinant FPV (rFPV-gfp-gpt-AHHA) was generated by transfection of the recombinant transfer vector into the quail origin FPV pre-infected chicken embryo fibroblast and purified for several cycles of selection by using Marker genes of gfp and gpt. The rFPV-gfp-gpt-AHHA was identified by PCR, sequencing and western blot. The results proved that HA gene of AIV was integrated and expressed in the recombinant FPV. One-step growth curve showed that replication of rFPV-gfp-gpt-AHHA was similar to the parent FPV. However, the protection of rFPV-gfp-gpt-AHHA needs to further evaluate in chickens against ATV infection.

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来源
《中国预防兽医学报》 |2012年第5期|341-344|共4页
作者
焦同路; 陈化兰; 王靖飞; 赵双成; 王世达; 常晓飞; 田石; 柳金雄; 李雁冰; 姜永萍;
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作者单位

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所疫病诊断与技术服务中心,黑龙江哈尔滨150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所疫病诊断与技术服务中心,黑龙江哈尔滨150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所疫病诊断与技术服务中心,黑龙江哈尔滨150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001;

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正文语种 chi
中图分类 S831.7;
关键词
H5亚型禽流感病毒; 重组禽痘病毒; HA基因;

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