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同时检测犬瘟热病毒、犬细小病毒、Ⅰ型和Ⅱ型犬腺病毒多重PCR方法的建立

         
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摘要

为建立检测多种犬病的多重PCR方法,本研究根据GenBank登录犬瘟热病毒(CDV)的N基因序列、犬细小病毒(CPV)的NS基因序列和犬腺病毒(CAV)的E3基因序列,设计合成3对特异性引物.通过优化反应条件,建立同时扩增CDV (507 bp)、CPV (287 bp)、CAV-Ⅰ (590 bp)和CAV-Ⅱ(1 027 bp)的多重PCR方法.实验结果表明:在同一PCR反应体系中可以同时检测以上4种病毒,而狂犬病病毒检测为阴性；CDV、CPV、CAV-Ⅰ和CAV-Ⅱ的最低检出限分别为101.9 TCID50、101.7 TCID50、101.7 TCID50和102.2 TCID50.利用该方法对由黑龙江省不同地区所采集的30份犬病料样品进行检测,CDV阳性率为23.33％(7/30)、CPV阳性率为20％(6/30)、CAV-Ⅰ和CAV-Ⅱ的阳性率均为3.33％(1/30),证明建立的PCR方法可以用于临床诊断.%To establish a method for simultaneous detection of canine distemper virus (CDV), canine parvovirus (CPV), canine adenovirus-Ⅰ (CAV-Ⅰ) and canine adenovirus-H (CAV-Ⅱ), a multiplex PCR was developed with a set of specific primers designed based on the conserved sequences within N gene of CDV, NS gene of CPV and E3 gene of CAV. Under the optimized conditions of multiplex PCR, four special fragments of 507 bp (CDV), 287 bp (CPV), 590 bp (CAV-I) and 1,027 bp (CAV-II) were amplified with a detection limit of 101.9 TCID50, (CDV), 101.7 TCTD50 (CPV), 101.7 TCID50 (CAV-I) and 1022 TCID50, (CAV-II), respectively. The results of specificity showed that no PCR product was detected for rabies virus (RV). Thirty clinical samples of affected dogs from different areas of Heilongjiang province were detected by the multiplex PCR, and the detection rate were 23.33% (7/30) for CDV, 20% (6/30) for CPV, 3.33% for CAV-I and CAV-Ⅱ, which indicated that the multiplex PCR forrndetecting CDV, CPV, CAV-Ⅰ and CAV-Ⅱ was rapid, specific and sensitive, and could be used in clinic diagnoses.

著录项

  • 来源
    《中国预防兽医学报》 |2012年第11期|911-914|共4页
  • 作者

    刘大飞; 华育平; 曲连东; 张洪英; 姜一曈; 戚亭; 程景; 刘立奎; 林文君; 柴洪亮; 杨天阔; 王翀;

  • 作者单位

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,黑龙江哈尔滨 150001;

    东北林业大学野生动物资源学院,黑龙江哈尔滨 150040;

    东北林业大学野生动物资源学院,黑龙江哈尔滨 150040;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,黑龙江哈尔滨 150001;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,黑龙江哈尔滨 150001;

    中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京 100081;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,黑龙江哈尔滨 150001;

    黑龙江省农产品质量检验检测中心,黑龙江哈尔滨 150090;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,黑龙江哈尔滨 150001;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,黑龙江哈尔滨 150001;

    东北林业大学野生动物资源学院,黑龙江哈尔滨 150040;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,黑龙江哈尔滨 150001;

    东北林业大学野生动物资源学院,黑龙江哈尔滨 150040;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 家畜病毒学;
  • 关键词

    犬瘟热病毒; 犬细小病毒; 犬腺病毒;

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