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网状内皮组织增生病病毒反向遗传操作系统的建立

         

摘要

为建立网状内皮组织增生病痛毒(REV)的反向遗传操作系统,本研究分别以6个含有连续并且部分重叠的REV HLJR0901株基因组片段的重组质粒为模板,通过重叠延伸PCR(SOE PCR)和酶切拼接将HIJR0901的全基因组克隆于pBluescript Ⅱ载体中,并在基因组中通过改变核苷酸(C2250G)消除了其中的Msc Ⅰ酶切位点作为分子标签,构建了REV感染性分子克隆pBlu-mHLJR0901.测序结果表明,REV HLJR0901株前病毒DNA全长为8284 bp.将pBlu-mHLJR0901转染鸡胚成纤维细胞(CEF)进行病毒拯救,间接免疫荧光、PCR、测序及电镜观察表明拯救出REV.其拯救的REV在CEF细胞上具有与亲本毒相似的复制特性.该反向遗传操作系统的建立为REV的深入研究提供了有效的技术操作平台.

著录项

  • 来源
    《中国预防兽医学报》 |2010年第9期|659-663|共5页
  • 作者单位

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室,黑龙江,哈尔滨,150001;

    东北农业大学,动物医学学院,黑龙江,哈尔滨,150030;

    黑龙江畜牧兽医职业学院,黑龙江,双城,150111;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室,黑龙江,哈尔滨,150001;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室,黑龙江,哈尔滨,150001;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室,黑龙江,哈尔滨,150001;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室,黑龙江,哈尔滨,150001;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室,黑龙江,哈尔滨,150001;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室,黑龙江,哈尔滨,150001;

    中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室,黑龙江,哈尔滨,150001;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 家畜病毒学;
  • 关键词

    网状内皮组织增生病; 感染性分子克隆; 病毒拯救;

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