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鸡痘病毒基因探针检测方法的建立及初步应用

         

摘要

利用PCR方法成功克隆了鸡痘病毒(Fowl poxvirus,FPV)4b核心蛋白基因549 bp片段,序列分析表明,该序列与模板DNA(AF198100)碱基序列的同源性为99.45%,只有3个碱基差异,第215位由C→T,第386位由T→A,第388位由G→A.回收FPV 4b核心蛋白基因549bp片段,以其为模板制备了地高辛标记的DNA探针.对新标记的探针进行标记效率检测,结果显示其标记效率为100mg/L;敏感性检测表明,该探针对同源DNA的检出限量为10pg;特异性检测结果表明,用本试验所标记的探针对提取的FPV 282E4和FPV JL株DNA、重组质粒pMD 18-T-4b进行检测结果均呈阳性,而鸡马立克氏病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、CEF的核酸提取物均成阴性,说明该探针具有较强的特异性.初步应用表明,本试验所建立的FPV的基因探针检测法可用于FPV的检测.

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