猪A组轮状病毒VP4全基因在大肠杆菌中的表达与检测

王春凤; 沈明浩; 王会岩; 刘尚高

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以猪轮状病毒mRNA为模板,应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,扩增了2331bp的VP4全基因,通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至pGEM-T Vector中,成功地构建出克隆质粒pGEM-T-VP4.以BamHⅠ和SalⅠ双酶切pGEM-T-VP4和pGEX-6P-1,并将纯化的VP4基因亚克隆至融合型表达载体pGEX-6P-1中,构建出原核表达质粒pGEX-6P-VP4.将pGEX-6P-VP4转化至感受态E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,可见约111.47 ku融合蛋白带.Western blot分析发现,该蛋白具有轮状病毒抗原性,从而为进一步研究轮状病毒的亚单位疫苗及DNA疫苗奠定基础.

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来源
《中国预防兽医学报》 |2005年第5期|344-347|共4页
作者
王春凤; 沈明浩; 王会岩; 刘尚高;
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作者单位

吉林农业大学,动物科学技术学院,吉林,长春,130118;

吉林农业大学,食品科学院,吉林,长春,130118;

吉林农业大学,动物科学技术学院,吉林,长春,130118;

中国农业大学,动物医学院,北京,100094;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类 DNA和RNA反录病毒;基因的表达;
关键词
轮状病毒; VP4基因; 克隆与原核表达;

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