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鸡组织细胞端粒相关序列的克隆及序列分析

         

摘要

根据真核细胞端粒DNA序列的共同特点,设计了一条引物(TELO02)(24nt).按照TaKala克隆试剂盒的介绍方法,染色体基因组DNA经HaeⅢ和HinfⅠ两种限制性内切酶酶切后,先进行初级PCR(C1和TELO02)02)扩增,得到的产物为模板再经过次级PCR(C2和TELO2)扩增,得到的产物用试剂盒回收,并连接到PMD-18-T载体上,转化到JM109受体菌中.从阳性克隆中提取质粒DNA进行PCR和酶切鉴定,确认后进行序列测定,获得了一段243sbp的鸡端粒相关序列.此序列与人第7条染色体基因组末端序列的同源性为63.5%;与鼠端粒旁序列同源性为63.2%;而与MDV基因组序列的BamHⅠ酶切片段76.6%同源.

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