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绵羊肺炎支原体对肺上皮细胞自噬影响的研究

         
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摘要

自噬是一种广泛存在于真核细胞中的生理现象,在维持细胞稳态及抗感染免疫过程中发挥着重要作用.但是,绵羊肺炎支原体(MO)与细胞自噬的关系尚不明确.为研究MO感染宿主呼吸道上皮细胞后是否发生细胞自噬,本实验以小鼠肺脏上皮细胞TC-1为研究对象,经RT-PCR检测MO(MOI 10)感染TC-1细胞后不同时间自噬相关基因的转录水平.结果显示,与感染前相比自噬相关基因LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、P62及Atg7的转录水平均显著上升(p<0.05),并且在感染6 h转录水平最高(分别上升1.8倍、1.5倍、1.6倍和2.3倍);Western blot检测MO感染TC-1细胞后不同时间自噬相关蛋白的表达.结果显示,与感染前相比,LC3Ⅱ、P62及Atg7的蛋白表达水平均显著上升(p<0.05),并且在感染12 h蛋白表达量最高(分别上升2.4倍、5.8倍、3.1倍).以上结果从转录水平和蛋白水平均表明MO能引起TC-1细胞的自噬.利用腺病毒mRFP-GFP-LC3转染TC-1细胞24 h后感染MO,6 h、12 h、24 h后分别经荧光显微镜观察细胞内绿色和红色斑点的变化,监测MO诱导的细胞自噬流.结果显示,与未感染组相比,MO感染TC-1细胞内有更多的黄色(红色和绿色斑点叠加,表示自噬体)和红色斑点(p<0.05),并且随着感染时间的延长红色斑点增多,表明MO可诱导TC-1细胞形成完整的自噬流.通过siRNA技术沉默TC-1细胞中P62和Atg7基因的表达,利用western blot检测该两个基因沉默后细胞中LC3Ⅱ蛋白的表达.结果显示,MO分别感染P62和Atg7沉默后的TC-1细胞12 h时,LC3Ⅱ蛋白表达量均显著下降(p<0.01),表明P62、Atg7基因沉默后,抑制了MO诱导的细胞自噬.MO分别感染P62及Atg7基因沉默后的TC-1细胞,利用变色单元(CCU)试验检测MO的增殖.结果显示,MO在P62或Atg7基因沉默后的TC-1细胞中的增殖能力均显著增强(p<0.05),表明自噬对MO在TC-1细胞中的增殖起到一定的抑制作用.本实验为进一步揭示MO的感染机制提供新的研究思路,也为该病的治疗提供参考依据.

著录项

  • 来源
    《中国预防兽医学报》 |2020年第12期|1268-1274|共7页
  • 作者

    罗海霞; 孙远航; 徐兆坤; 冯婷婷; 郝秀静; 李敏;

  • 作者单位

    宁夏大学生命科学学院西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室 宁夏 银川 750021;

    宁夏大学生命科学学院西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室 宁夏 银川 750021;

    宁夏大学生命科学学院西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室 宁夏 银川 750021;

    宁夏大学生命科学学院西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室 宁夏 银川 750021;

    宁夏大学生命科学学院西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室 宁夏 银川 750021;

    宁夏大学生命科学学院西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室 宁夏 银川 750021;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 霉形体（支原体）;
  • 关键词

    绵羊肺炎支原体; 自噬; TC-1细胞;

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