H3N2亚型猪流感病毒血凝素单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定

陈艳; 王飞飞; 杨焕良; 乔传玲; 陈化兰; 张秀英

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H3N2亚型猪流感病毒血凝素单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定

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为制备H3N2亚型猪流感病毒(SIV)血凝素(HA)蛋白的特异性单克隆抗体(MAb)并对其抗原表位进行鉴定,本研究采用RT-PCR方法扩增H3N2亚型SIV的HA基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGs中,获得重组质粒pCAGGs-HA,以重组质粒pCAGGs-HA免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,采用血凝抑制(HI)试验和ELISA方法筛选出1株稳定分泌抗SIV HA1蛋白MAb的杂交瘤细胞株(3F8),经ELISA检测结果显示其诱导小鼠产生的腹水效价为1∶106;HI试验检测结果显示其效价为12 log2.利用噬菌体随机7肽库对纯化的抗H3N2亚型SIV HA1蛋白的MAb 3F8进行了 4轮筛选,经DNA测序得到3个7肽序列,分别是"HPRRRRV"(E1)、"WPFHHHR"(E2),"IERGRTS"(E3),3个7肽序列经比对显示与 H3N2 SIV HA1 蛋白有部分同源区,为HA蛋白的模拟表位,分别位于HA1蛋白序列的157、158位(E1)、196、199、200位(E2)、276、279、282位(E3),即位于流感病毒HA蛋白5个抗原位点中的B位点与C位点,且均位于HA1段上,与制备的抗HA1段蛋白的MAb鉴定结果一致.本研究制备了 SIVH3N2亚型的HA蛋白MAb,并利用噬菌体短肽库技术获得该SIV HA模拟表位,为进一步设计具有广谱保护性的SIV表位疫苗提供了数据支持.

著录项

来源
《中国预防兽医学报》 |2021年第6期|633-638|共6页
作者
陈艳; 王飞飞; 杨焕良; 乔传玲; 陈化兰; 张秀英;
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作者单位

东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨 150030;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业农村部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨 150069;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业农村部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨 150069;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业农村部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨 150069;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业农村部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨 150069;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业农村部动物流感重点开放实验室黑龙江哈尔滨 150069;

东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨 150030;

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正文语种 chi
中图分类家畜病毒学;
关键词
H3N2; 猪流感病毒; 单克隆抗体; 噬菌体展示; 抗原表位;

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