基于非洲猪瘟病毒E199L蛋白间接ELISA方法的建立

范婷婷; 何希君; 张险峰

首页> 中文期刊> 《中国预防兽医学报》 >基于非洲猪瘟病毒E199L蛋白间接ELISA方法的建立

基于非洲猪瘟病毒E199L蛋白间接ELISA方法的建立

开具论文收录证明 >>

期刊封面封底目录下载 >>

文献代查 >>

页面导航

摘要
著录项
相似文献
相关主题

摘要

为建立非洲猪瘟病毒(ASFV)间接ELISA抗体的检测方法,本研究从ASFV Pig/HLJ/2018株基因组中经PCR扩增E199L基因序列,将其克隆至p ET-32a(+)原核表达载体进行表达并纯化,表达的蛋白经SDS-PAGE和western blot鉴定后,用纯化的重组E199L蛋白(rE199L)作为包被抗原,利用矩阵法优化各反应条件,建立了检测ASFV E199L蛋白抗体的间接ELISA方法,并检测了该方法的特异性、敏感性和重复性。利用该方法及进口商品化试剂盒对196份猪临床血清样品进行检测,计算二者的符合率。SDS-PAGE及western blot结果显示,正确表达并纯化了rE199L,且rE199L具有良好的反应原性。间接ELISA方法反应条件的优化结果为:rE199L最佳包被浓度为4μg/mL;最佳血清稀释度1:100,37℃作用45 min;5%脱脂乳37℃封闭60 min;兔抗猪HRP-IgG最佳稀释度为1:10000,37℃孵育60 min。建立的该方法除了对ASFV阳性猪血清检测结果为阳性外,对PRRSV、PEDV、CSFV、PCV、PPV和PRV阳性猪血清均为阴性结果;敏感性试验结果显示,该方法可检测阳性血清的最大倍数为1:1600;批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%。196份临床猪血清样品的检测结果显示,该间接ELISA方法的阳性检出率为89.3%(175/196),阴性样品检出率为10.7%(21/196);商品化试剂盒的阳性检出率为90.8%(178/196),阴性样品检出率为9.2%(18/196)。二者的符合率为98.3%。建立的该方法特异性强、敏感性高、重复性好,可以满足临床检测和实验评价的需求,为ASFV抗体检测提供更多的方法选择。

著录项

来源
《中国预防兽医学报》 |2022年第1期|41-46|共6页
作者
范婷婷; 何希君; 张险峰;
展开▼
作者单位

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所病原与病理形态学创新团队;

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家动物疫病防控高级别生物安全实验室;

展开▼
原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类家畜免疫学;
关键词
非洲猪瘟; E199L; 原核表达; 间接ELISA;

相似文献

中文文献
外文文献
专利

1. 基于重组EP153R蛋白的检测非洲猪瘟病毒抗体的间接ELISA方法的建立 [J] . 程佳 ,李遥 ,刘英楠 . 中国动物传染病学报 . 2022,第2期
2. 基于CHO-K1细胞稳定表达的非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的间接ELISA抗体检测方法的建立 [J] . 蒋智勇 ,蔡汝健 ,李艳 . 中国兽医科学 . 2022,第2期
3. 基于非洲猪瘟病毒pA104R蛋白的间接ELISA检测方法的建立与应用 [J] . 王兆贵 ,赵亚茹 ,杨吉飞 . 中国兽医科学 . 2021,第4期
4. 非洲猪瘟病毒p30蛋白的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立与应用 [J] . 张锦 ,陈艳 ,邹剑文 . 畜牧与兽医 . 2022,第3期
5. 非洲猪瘟病毒结构蛋白p54的优化表达及间接ELISA抗体检测方法的建立 [J] . 张皓淳 . 国外畜牧学:猪与禽 . 2022,第2期
6. 猪瘟病毒E2蛋白IgM抗体间接ELISA检测方法的建立 [C] . 李文良 ,毛立 ,张纹纹 . 中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次全国会员代表大会暨第三次学术研讨会 . 2012
7. 基于非洲猪瘟病毒pA104R蛋白抗体检测间接ELISA方法的建立 [A] . 王兆贵 . 2021

基于非洲猪瘟病毒E199L蛋白间接ELISA方法的建立

摘要

著录项

相似文献

相关主题

期刊订阅