小亚璃眼蜱CPL截短基因的多克隆抗体制备及其应用研究

翟雪洁; 郝蕴伟; 阿力木江·加帕尔; 宋瑞其; 诺明达来; 蒋倩; 何文文; 郑会珍; 巴音查汗

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组织蛋白酶L(CPL)是半胱氨酸蛋白水解酶,属于木瓜蛋白酶家族,参与蜱对血红蛋白降解与消化,是一种潜在的抗蜱疫苗候选抗原。为了制备小亚璃眼蜱(H.anatolicum)CPL多克隆抗体,并对其初步应用,本研究利用PCR方法扩增CPL截短基因(HanCPL)后构建pET-28a-HanCPL和pEGFP-C3-HanCPL质粒,pET-28aHanCPL经IPTG诱导后通过SDS-PAGE检测重组HanCPL蛋白(rHanCPL)的表达,结果显示,正确构建了pET-28a-HanCPL和p EGFP-C3-HanCPL质粒;rHanCPL以包涵体形式表达,分子量大小约为27 ku,可以被兔抗His tag抗体特异性识别;利用亲和层析柱和尿素透析法纯化rHanCPL后经western blot鉴定纯化效果,并测浓度后免疫新西兰兔,制备rHanCPL多克隆抗体,经western blot检测rHanCPL的反应性,采用间接ELISA测定多克隆抗体的效价。结果显示,rHanCPL纯化效果较好,浓度为3 mg/mL;rHanCPL可以与其多克隆抗体发生特异反应,且制备的r HanCPL多克隆抗体效价高达1:204800,可用于后续试验。利用制备的rHanCPL多克隆抗体作为一抗,通过免疫组化试验检测天然CPL在H.anatolicum中的定位,结果显示,天然CPL蛋白可以被rHanCPL多克隆抗体特异性识别,且其定位于H.anatolicum中的肠上皮细胞;另外将pEGFP-C3-HanCPL质粒转染至HEK-293T中,以制备的rHanCPL多克隆抗体作为一抗,使用western blot和IFA方法检测重组蛋白(EGFP-HanCPL)的表达及定位情况,结果显示EGFP-HanCPL蛋白也可与rHanCPL多克隆抗体特异性结合,其分子量约为46 ku,其主要定位于细胞质。本研究利用表达的rHanCPL制备了r HanCPL多克隆抗体,并初步将该多克隆抗体用于CPL的相关研究,为后续抗蜱疫苗蛋白抗原的筛选提供参考依据。

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来源
《中国预防兽医学报》 |2022年第6期|655-660|共6页
作者
翟雪洁; 郝蕴伟; 阿力木江·加帕尔; 宋瑞其; 诺明达来; 蒋倩; 何文文; 郑会珍; 巴音查汗;
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作者单位

新疆农业大学动物医学学院;

石河子大学医学院基础医学系;

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正文语种 chi
中图分类家畜寄生虫学;
关键词
小亚璃眼蜱; 组织蛋白酶L; 多克隆抗体; 免疫组化;

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