表达O型FMDV衣壳蛋白重组腺病毒的构建及其对小鼠免疫效力的研究

刘彦玲; 裴艳艳; 李敏杰; 杨德成; 王海伟; 于力; 田志军; 周国辉

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已有研究发现口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A含有FMDV主要抗原决定簇,并在3C蛋白酶的裂解下表达FMDV衣壳蛋白,诱导机体产生高水平的体液免疫应答。为了研究FMDV衣壳蛋白对鼠体内体液免疫应答的影响,本研究构建了含有O型FMDV P1-2A-3C基因的重组腺病毒表达载体,经双酶切鉴定正确后采用同源重组方法构建重组腺病毒rAdV-P12A3C,传代后经PCR鉴定,结果显示各代次均检测到预期的3.5 kb的目的条带,获得了r AdV-P12A3C。将r AdV-P12A3C连续传代后,分别利用IFA和western blot检测rAdV-P12A3C第2、4、6、8代时外源基因在293细胞中的表达情况。结果显示,获得了表达FMDV P1-2A-3C基因的rAdV-P12A3C,且外源基因在病毒传代过程中均能够稳定表达。将其感染293细胞后测定rAdV-P12A3C各时间点的病毒效价并绘制一步生长曲线,结果显示,该r AdV-P12A3C传至第8代时病毒效价可达7.2×10^(8)TCID/mL,各时间点病毒效价与亲本病毒差异均不显著,表明外源基因插入后对重组腺病毒的病毒滴度未造成明显影响。将rAdV-P12A3C免疫BALB/c小鼠,对BALB/c小鼠采血并分离血清,通过间接ELISA方法检测鼠体内的抗体,结果显示,rAdVP12A3C免疫组、O型FMDV灭活疫苗组及rAdV-P12A3C与206佐剂乳化组BALB/c小鼠均在首免后7周(二免后3周)VP1抗体达到峰值,之后抗体水平逐渐下降,到第24周抗体水平接近阴性,且rAdV-P12A3C与206佐剂乳化组产生的VP1抗体水平极显著高于另外两个免疫组(P<0.001)。表明rAdV-P12A3C能够刺激BALB/c鼠体内产生IgG抗体。本研究结果首次表明:rAdV-P12A3C能够表达FMDV衣壳蛋白,并能在小鼠体内产生高水平的体液免疫应答,为新型口蹄疫候选疫苗研究奠定了基础。

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来源
《中国预防兽医学报》 |2022年第6期|636-641|共6页
作者
刘彦玲; 裴艳艳; 李敏杰; 杨德成; 王海伟; 于力; 田志军; 周国辉;
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作者单位

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所猪病综合防控创新团队;

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正文语种 chi
中图分类家畜病毒学;
关键词
口蹄疫病毒; P1-2A-3C基因; 重组腺病毒; 免疫原性;

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