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神经纤毛蛋白1在辐射诱导肺上皮细胞转化中的调控作用

         
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目的 通过利用神经纤毛蛋白1（NRP1）不同表达水平的肺上皮细胞模型,检测电离辐射诱导上皮-间充质转化（EMT）标志物及相关转录因子表达变化,探讨NRP1对辐射诱导肺上皮细胞EMT发生中的作用。方法 对人肺Ⅱ型上皮细胞（A549）构建NRP1过表达（NRP1high-A549）和NRP1敲低（NRP1low-A549）细胞模型,同时对小鼠正常肺上皮细胞（MLE-12）构建siNRP1-MLE-12细胞模型并进行验证。对NRP1high-A549、NRP1low-A549和siNRP1-MLE-12细胞模型分别进行单次10 Gy X射线照射,于照射后0、12、24和48 h提取总蛋白和总RNA。利用Western blot法和q-PCR法检测各组细胞模型中EMT标志物（β-catenin、N-cadherin和Vimentin）及相关转录因子（Twist和ZEB1）的变化。结果 野生型A549和MLE-12细胞照射后NRP1 mRNA和蛋白表达显著升高,间充质标志物（Vimentin和N-cadherin）显著升高（A549：t＝2.917、7.361,P＆0.01；MLE-12：t＝9.652、31.357,P＆0.01）,ZEB1和Twist转录因子表达显著升高（A549：t＝4.852、9.278,P＆0.01；MLE-12：t＝30.985、17.266,P＆0.01）。NRP1low-A549和siNRP1-MLE-12组受照后Vimentin和N-cadherin表达显著下降（NRP1low-A549：t＝10.077、15.707,P＆0.01；siNRP1-MLE-12：t＝5.745,P＆0.01）,上皮标志物（β-catenin）蛋白表达显著升高；而NRP1high-A549组照射后N-cadherin和Vimentin显著升高（t＝16.055、5.560,P＆0.01）,而β-catenin显著下降。检测NRP1low-A549组Twist转录因子在照射后显著下降（t＝3.987,P＆0.01）,而NRP1high-A549组ZEB1和Twist转录因子照射后呈时间依赖性升高（t＝11.289、2.903,P＆0.01）；siNRP1-MLE-12细胞模型照射后ZEB1转录因子显著下降（t＝13.449,P＆0.01）,siNRP1-MLE-12组ZEB1和Twist蛋白表达均低于对照组,呈时间依赖性下降。结论 NRP1可促进辐射诱导人和小鼠上皮细胞的EMT发生,而这种促进作用可能通过上调转录因子ZEB1和Twist的表达。

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