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Dishevelled 2对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞血管内皮生长因子表达的影响

         

摘要

目的对RA成纤维样滑膜细胞(FLS)体外分离培养方法进行优化,观察Dishevelled 2(Dvl 2)在RA-FLS中对血管内皮生长因子(VEGF)分泌的影响。方法将行膝关节置换的RA患者滑膜剪碎,利用优化的组织块法进行RA-FLS体外分离培养。构建Dvl 2慢病毒过表达质粒,转染后利用Q-PCR及ELISA检测VEGF mRNA及蛋白表达情况。然后再将转染后RA-FLS予TNF-α重组蛋白10 ng/ml刺激24 h,再次检测VEGFmRNA及蛋白表达情况。采用两独立样本t检验进行统计分析。结果成功将RAFLS分离并进行体外培养。当感染复数为30并配合使用适当浓度的polybrene促进转染即可满足实验要求,Dvl 2的mRNA较空病毒对照组升高79倍。与空病毒对照组相比,Dvl 2对RA-FLS分泌VEGF有轻度抑制作用;TNF-α刺激后,Dvl 2达表达组VEGF的mRNA[(2.15±0.10)倍,(2.92±0.47)倍,t-3.924,P=0.003]及蛋白[(285±100)pg/ml,(155±61)pg/ml,t=-2.714,P=-0.022]均低于空病毒对照组。结论 Dvl 2可抑制TNF-α对RA-FLS分泌VEGF的促进作用,具体机制有待进一步研究。

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