慢病毒介导的Aggrecanase-1 shRNA转染体外培养的类风湿关节炎患者软骨细胞的研究

杜清峰; 王英振; 张海宁; 刘英魁; 杜明; 程莉; 王永; 冯志强; 张宝安; 宋振; 王宁; 谭玉春; 王亮; 杜小卫

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目的探讨慢病毒介导的RNA干扰在软骨细胞的可行性,确定是否可以通过抑制软骨细胞中Aggrecanase-1的表达实现对软骨中Aggrecan的保护作用。方法将设计并构建的shRNA Aggrecanase-1慢病毒表达载体转染进RA患者关节软骨细胞。通过荧光定量PCR检测转染后不同时间点不同转染复数下Aggrecanase-1及Aggrecan mRNA水平的变化;通过免疫细胞化学方法测定各组Aggrecan蛋白水平表达量的变化,所有数据利用SPSS 19.0软件,采用配对t检验及方差分析进行统计分析。结果由慢病毒介导的RNA干扰中,随着Aggrecanase-1 mRNA表达水平显著下降,Aggrecan mRNA和蛋白表达也相应地增加,特别是shRNA4组变化较为显著,其中Aggrecanase-1 mRNA由开始的1.083±0.133降为0.074±0.004（t=35.71,P＜0.05）;Aggrecan mRNA由开始的1.182±0.160增加到2.922±0.169（t=19.43,P＜0.01）;同时Aggrecan蛋白多糖由开始的507±265增加到2 270±334（t=11.43,P＜0.05）。结论由慢病毒介导的RNA干扰可以实现对Aggrecanase-1表达的抑制,且对软骨细胞的表型和生长速度没有负面影响;慢病毒介导的RNA干扰可以通过抑制Aggrecanase-1的表达实现对Aggrecan的保护,是一种缓解软骨退化的有效途径。

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来源
《中华风湿病学杂志》 |2015年第1期||共页
作者
杜清峰; 王英振; 张海宁; 刘英魁; 杜明; 程莉; 王永; 冯志强; 张宝安; 宋振; 王宁; 谭玉春; 王亮; 杜小卫;
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作者单位

1. 青岛大学附属医院关节外科 2. 山东省平原县第一人民医院脊柱关节外科;

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正文语种 chi
中图分类类风湿性关节炎;
关键词
软骨细胞; RNA干扰; 蛋白聚糖蛋白酶-1;

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