RNA干扰靶向沉默白细胞介素-32γ基因对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖与凋亡的影响

刘宇宏; 王莎莎; 沈凌汛; 徐玉兰; 陈正望

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目的研究靶向白细胞介素（IL）一32Υ,的shRNA对类风湿关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞（FLS）增殖与凋亡的影响及其机制。方法设计合成靶向IL-32Υ的短发夹RNA（EASY-shRNA.IL-323Υ）,用脂质体法导入RA-FLS细胞中;反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白印迹法检测IL-32Υ,、cyclin D1及p-Akt的表达;四甲基偶氮唑蓝（MTr）法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;TUNEL法检测细胞凋亡。采用t检验进行统计分析。结果①针对序列1、2和3的EASY-shRNA-IL-32",/均能有效抑制FLS的IL-32的表达（P＜0.01）,最大抑制率分别为75.6%、66.2%和64.1%。②实验组在接种后3 d[A值:（0.23±0.03）对（0.35+0.03）和（0.36~0.04）,均P＜0.05]和5 d[A值:（0.27+0.03）对（0.52~0.05）和（0.53~0.04）,均P＜0.01]的细胞数量明显少于对照质粒组和未转染组。③实验组处于G1期的细胞比例为[（88±6）%],较对照质粒组[（69±5）%]和未转染组[（68±4）%]显著为高（均P＜0.05）;处于S+G2期的细胞比例为[（13.6±3.0）%],较对照质粒组[（30.2±4.1）%]和未转染组[（32.1±43）%]显著为低（均P＜0.01）。④实验组凋亡率为[（20.50±3.21）%],较对照质粒组[（9.20±0.32）%]和未转染组[（8.60±0.22）%]显著为高（均P＜0.01）。⑤实验组cyclin Dl和p-Akt的表达[分别为（0.36±0.04）和（031±0.03）]明显低于对照质粒组[分别为（O.59±0.08）和（0.53±0.06）]和未转染组[分别为（0.61±0.07）和（0.52±0.06）,均P＜0.01]。结论靶向IL-32Υ的shRNA抑制RA-FIS增殖并促进凋亡。其机制可能部分与下调cyelin D1和p-Akt的表达,从而延缓RA-FLS通过整个细胞周期和抑制其存活有关。

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来源
《中华风湿病学杂志》 |2012年第2期||共页
作者
刘宇宏; 王莎莎; 沈凌汛; 徐玉兰; 陈正望;
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作者单位

1. 华中科技大学同济医学院附属协和医院风湿免疫科 2. 生命科学与技术学院分子生物物理学教育部重点实验室;

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正文语种 chi
中图分类类风湿性关节炎;
关键词
白细胞介素32; 细胞增殖; 细胞凋亡; shRNA; 成纤维样滑膜细胞;

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