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小鼠骨髓成熟与未成熟树突状细胞的生物免疫学功能比较研究

         

摘要

目的比较成熟和未成熟状态小鼠骨髓树突状细胞(DC)的生物免疫学功能的差异。方法粒细胞-巨噬细胞刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素(IL)-4联合诱导培养小鼠骨髓未成熟DC,经LPS刺激制备成熟DC。分别收集培养第6天的两组DC并用小鼠CD11c免疫磁珠纯化。电镜下观察成熟和未成熟DC的细胞形态。经流式细胞术检测两组细胞表面分子(MHC-II、CD86和CD40)的表达水平。另将收集的DC分别与异基因小鼠脾脏T细胞共培养72 h,四唑蓝(MTT)比色法检测T细胞增殖程度。取细胞上清液,液相芯片法检测Th1/Th2细胞因子表达水平。结果电镜下可见两组DC在形态上存在很大差异。同成熟DC相比,未成熟DC细胞表面较光滑,细胞内存在大量的吞噬小泡。流式细胞术分析显示未成熟DC细胞表面3类分子(MHC-II、CD86和CD40)的表达水平均明显低于成熟DC组。混合淋巴细胞反应(MLR)显示,未成熟DC刺激T细胞增殖显著低于相应反应比例的成熟DC,差异有统计学意义(P< 0.05)。细胞因子表达谱表明未成熟DC组分泌Th1细胞因子(IL-2和IFN-γ)较成熟DC组显著下降(P< 0.01),Th2细胞因子相对占主导。结论未成熟DC倾向于诱导T细胞免疫耐受,有效抑制DC的成熟并维持DC的未成熟状态将有望用于治疗类风湿关节炎等由Th1细胞介导的自身免疫性疾病。

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