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不同方法提取SD大鼠膝关节软骨组织的总RNA

         

摘要

背景:目前文献报道的软骨RNA提取有多钟方法,国内文献报道多为经典Trizol法,在实验中发现该方法提取的RNA并不能满足后续实验的需要。目的:探索不同方法提取SD大鼠软骨组织总RNA的区别。方法:选取3月龄SD大鼠9只,分别采用Rneasy Lipid Tissue Kit、RNAout试剂盒和经典Trizol法对软骨组织进行总RNA提取,并通过RNA琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性,以探寻软骨总RNA最佳提取方案。结果与结论:Trizol法提取的RNA A260/A280值为1.58,说明纯度不高;RNAout法提取的RNA,由于软骨含有大量的蛋白多糖和胶原,也不能满足后续实验的需要;RNeasyMini Kit法和肝(Trizol)法提取RNA的A260/A280值分别为2.00和1.98,说明提取的总RNA或核酸的纯度高。RNA的完整性电泳结果显示,RNeasyMini Kit法、RNAout法和肝(Trizol)法可见28 s、18 s及5 s条带,而Trizol法未见任何条带,RNAout法28 s和18 s条带不清楚。结果提示Rneasy Lipid Tissue Kit法获得的总RNA纯度高、完整性和稳定性好,并能成功反转录合成双链c DNA,而RNAout试剂盒和经典Trizol法获得的总RNA不能满足后续实验需要。

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