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GDS-80手持基因枪在橡胶树遗传转化上应用的参数优化与配件改进

         

摘要

GDS-80手持基因枪是美国Wealtec公司2009年推出的基因传递系统,具有操作简便、高效的特点.已报道的橡胶树基因枪转化研究都是使用台式基因枪.本文首先利用考马斯亮蓝轰击滤纸去除明显不适合的参数,接着以绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因,轰击巴西橡胶树体细胞胚以及愈伤组织,用荧光显微镜观察绿色荧光,探究适合橡胶树的轰击参数.而且比较了 Image J软件和肉眼统计荧光斑点数及GDS-80手持基因枪与PDS-1000/He台式基因枪的差异.结果表明:对于橡胶树体细胞胚和愈伤组织,仅依靠原厂配件难以获得较好的转化效果.本文设计了直径3 cm(与轰击范围相同),高度2.5 cm,孔径60目的过滤网.同时改进装试验材料的培养皿,用刀片在培养皿的中心割出一个直径3 cm的圆圈,轰击胚状体时,将上述设计的过滤筛网正向卡在圆圈上,胚状体放入过滤网中,轰击时将培养皿用试管架架高,压力就从筛网及底部的空洞分解,微弹完全轰击到试验材料.轰击胚状体最优参数为:轰击压力为60psi,针状调节阀为3圈,目标间隔盘为6 cm.轰击愈伤时将材料放到普通培养皿中心的轰击范围内,反向盖上过滤筛网.最优轰击参数为:轰击压力为50psi,针状调节阀为4圈,目标间隔盘为6 cm.本文采用Image J软件进行荧光斑点计数,准确率与肉眼相当,但较肉眼省时.GDS-80手持基因枪与PDS-1000/He台式基因枪转化效率相当,但GDS-80手持基因枪每打一枪比PDS-1000/He台式基因枪快12 min.研究结果为橡胶树遗传转化提供了高效的基因枪转化体系,为转基因研究提供了一个高效的统计荧光数的软件.

著录项

  • 来源
    《热带作物学报》 |2021年第9期|2458-2467|共10页
  • 作者单位

    海南大学热带作物学院 海南海口 570228;

    农业农村部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室/中国热带农业科学院橡胶研究所 海南海口 571101;

    华中师范大学附属息县高级中学 河南息县 464300;

    农业农村部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室/中国热带农业科学院橡胶研究所 海南海口 571101;

    农业农村部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室/中国热带农业科学院橡胶研究所 海南海口 571101;

    农业农村部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室/中国热带农业科学院橡胶研究所 海南海口 571101;

    农业农村部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室/中国热带农业科学院橡胶研究所 海南海口 571101;

    农业农村部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室/中国热带农业科学院橡胶研究所 海南海口 571101;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 橡胶树;
  • 关键词

    巴西橡胶树; GDS-80; 基因枪; GFP基因; Image J;

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