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bcl-2对人小细胞肺癌细胞系H446/DDP多药耐药性的影响

         
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目的探讨bc l-2表达上调对人小细胞肺癌（SCLC）多药耐药的影响及相关机制。方法通过定向克隆方法,构建bc l-2正义RNA真核表达载体pLXSN-bc l-2;同时,体外合成bc l-2反义硫代磷酸寡核苷酸（AS-PS-ODNs）,然后采用脂质体分别将其转染至人SCLC H446细胞及H446/DDP细胞,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和W estern b lot方法检测转染细胞中bc l-2 mRNA和蛋白的表达水平;流式细胞仪DNA倍性分析观察顺铂（DDP）诱导转染细胞凋亡情况。转染时细胞分3组,pLXSN-bc l-2转染组[或bc l-2 AS-PS-ODNs转染组（AS-PS-ODNs转染组）]、pLXSN转染组[或bc l-2无义硫代磷酸寡核苷酸转染组（NS-PS-ODNs转染组）]和对照组（H446细胞组、H446/DDP细胞组）。结果（1）W estern b lot检测结果表明,对照H446细胞组、pLXSN转染组、pLXSN-bc l-2转染组间Bc l-2蛋白表达水平差异有统计学意义（F=11 221,P＜0.05）。转染pLXSN-bc l-2的H446细胞强表达Bc l-2蛋白（灰度值0.854±0.016）,与对照H446细胞组（灰度值为0.103±0.005）相比差异有统计学意义（t=2.45,P＜0.01）;NS-PS-ODNs转染组的H446/DDP细胞,AS-PS-ODNs转染组的H446/DDP细胞,对照H446/DDP细胞组间Bc l-2蛋白表达水平差异有统计学意义（F=11 028,P＜0.01）。转染bc l-2AS-PS-ODNs的H446/DDP细胞表达Bc l-2蛋白水平（灰度值为0.695±0.014）,与对照H446/DDP细胞组（灰度值为0.942±0.018）相比,显著下降（t=2.26,P＜0.01）,但仍高于亲代H446细胞Bc l-2表达水平（t=2.31,P＜0.01）。（2）流式细胞仪DNA倍性分析结果显示,转染pLXSN-bc l-2的H446细胞,经5μg/m l DDP诱导后凋亡率为（20.9±0.2）%,明显低于对照H446细胞组的（31.1±0.21）%,差异有统计学意义（t=2.45,P＜0.01）;5μg/m l DDP诱导转染AS-PS-ODNs的H446/DDP细胞的凋亡率为（31.5±0.4）%,对照H446/DDP细胞组的凋亡率为（9.0±0.1）%,转染细胞的凋亡率显著增加（P＜0.05）。结论靶向性抑制抗凋亡相关基因bc l-2的表达可能是克服SCLC化疗耐药的重要的基因治疗方法之一。

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