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基于猴痘病毒A27L蛋白的间接ELISA抗体检测方法的建立

         
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猴痘病毒(MPXV)是一种能引起人兽共患病的正痘病毒属(Orthopoxvirus)成员,在人群和野生动物中具有较高的感染率,对人类公共卫生安全造成重大威胁。为了建立快速、准确的MPXV感染抗体ELISA检测方法,对人群和动物中MPXV感染情况进行流行病学监测,本研究构建了MPXV-A27L蛋白的原核表达系统,以其作为包被抗原建立了MPXV间接ELISA抗体检测方法,并优化了一系列反应条件,确定了检测结果判定标准,评估了建立方法的特异性、重复性和敏感性。结果显示,成功表达了MPXV-A27L蛋白,确定了ELISA最佳反应条件:抗原包被浓度为0.25μg/mL;1%BSA封闭1 h;待检血清1∶200稀释,37℃孵育30 min;酶标二抗1∶20000稀释,孵育30 min;底物显色10 min。待检血清样品OD 450值>0.316时判定为阳性,OD 450值<0.262时判定为阴性,OD 450值介于0.262~0.316时则判为可疑。该检测方法与山羊痘病毒属的山羊痘病毒(GTPV)、绵羊痘病毒(SPPV)和牛结节性皮肤病病毒(LSDV)阳性血清不发生交叉反应;批内变异系数为2.75%~7.45%,批间变异系数为6.55%~9.59%;该方法可检测到血清最大稀释度为1∶104。结果表明,本研究建立的MPXV间接ELISA抗体检测方法具有良好的特异性、重复性和敏感性,为MPXV的临床检测和流行病学调查提供了依据,对于猴痘疫情的防控具有重要作用。

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