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猪圆环病毒3型衣壳蛋白的原核表达与鉴定

         
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为获取猪圆环病毒3型衣壳蛋白(PCV3-Cap蛋白),本试验参照PCV3 HBBD1810毒株(GenBank登录号:MK105924)的基因组序列信息合成cap基因,并将其克隆至原核表达载体pET-32a中,对重组质粒进行测序和双酶切鉴定后,将重组质粒转化Rosetta大肠杆菌,对最佳IPTG诱导浓度和诱导表达时间筛选,并对目的蛋白表达后的存在形式进行检测以及对纯化条件进行筛选,透析复性后利用鼠源抗PCV3-Cap单克隆抗体进行Western blot以验证目的蛋白的反应原性。结果显示,通过构建原核表达系统获得大小为42 kDa的PCV3-Cap蛋白;破菌处理后目的蛋白主要以包涵体形式存在于沉淀中;0.2 mmol/L IPTG 37℃下诱导培养8 h后蛋白表达量较高;在300 mmol/L咪唑洗脱时纯化出清晰条带;经过Western blot验证目的蛋白能够被鼠源抗PCV3-Cap单克隆抗体识别,具有良好的反应原性。结果表明,本试验成功构建了PCV3-Cap蛋白表达载体,成功表达PCV3-Cap蛋白,同时优化了表达和纯化条件,为PCV3亚单位疫苗的研制以及检测试剂盒的开发和研究提供了科学依据。

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