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间接血凝检测鸡柔嫩艾美耳球虫血清抗体方法的建立

         

摘要

为了快速检测免疫球虫后宿主血清中特异性抗体的水平,以DE-52层析纯化子孢子、裂殖子,超声裂解获取可溶性蛋白;原核表达EtMIC4-N蛋白,致敏戊二醛醛化后的红细胞,以人工免疫柔嫩艾美耳球虫后分离的血清为阳性血清,以SPF鸡分离的血清为阴性血清,建立柔嫩艾美耳球虫间接血凝试验.结果显示,稀释度为1∶2万鞣酸处理戊二醛醛化后的红细胞,使用100 μg,/mL可溶性裂殖子、子孢子蛋白或12.5 μg/mL表达的重组蛋白EtMIC4-N均可以与阳性血清发生反应(可达1∶1 024),与鸡的阴性血清及大肠杆菌病的阳性血清无反应,与堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫阳性血清有微弱反应(不超过1∶8).试验证明,该方法具有简单、方便、快捷、灵敏等优点.

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