禽波氏杆菌RAPD-PCR反应体系的建立与优化

杨萍萍; 赵雪; 刘冠华; 贺晓华; 朱瑞良

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禽波氏杆菌RAPD-PCR反应体系的建立与优化

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随机扩增多态性DNA (RAPD)作为一种分子标记技术,可用于多种病原菌的基因分型.为建立适合禽波氏杆菌RAPD分析的扩增体系,本试验以禽波氏杆菌基因组DNA为模板,对20条随机引物进行了筛选,并对RAPD-PCR反应体系中的重要参数设置梯度进行单因素试验分析,以确定最佳反应条件.经大量重复试验筛选到6条随机引物,确定25 μL的反应体系中模板DNA的量为50 ng,随机引物浓度为0.2 μmol/L,dNTPs的量为0.2 mmol/L,Mg2+浓度为1 mmol/L,Taq酶为1U.该优化体系对22株禽波氏杆菌均能扩增出清晰稳定且多态性好的DNA指纹图谱,为后续的禽波氏杆菌RAPD基因分型奠定了良好的基础.

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来源
《中国兽医杂志》 |2013年第11期|16-19|共4页
作者
杨萍萍; 赵雪; 刘冠华; 贺晓华; 朱瑞良;
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作者单位

山东农业大学动物科技学院,山东泰安271018;

山东农业大学动物科技学院,山东泰安271018;

山东农业大学动物科技学院,山东泰安271018;

山东农业大学动物科技学院,山东泰安271018;

山东农业大学动物科技学院,山东泰安271018;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类病原细菌;
关键词
禽波氏杆菌; RAPD; 反应体系; 优化;

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