用猪睾丸(Swine testicle,ST)细胞繁殖并扩增猪传染性胃肠炎病毒国内分离株TH-98,根据GenBank中已发表的TGEV S基因cDNA序列,利用Oligo4.1程序软件设计并合成两对引物,进行逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),扩增出2.3kb和2.1kb两个片段,分别命名为Sa与Sb,先后插入到pUC18质粒载体上的EcoRI和PstI多克隆位点上,构建了重组质粒pUC-S.根据TGEV S 基因位点和pUC18的物理图谱,用相应的限制性内切酶进行酶切及套式PCR方法进行鉴定、分析,证明克隆的pUC-S为TGEV S 基因.同时对pUC-S进行序列测定分析,并与来自美国、英国和日本的五个毒株进行核苷酸及编码氨基酸同源性比较,证明了S基因的高度保守性.
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