山羊隐花色素2基因真核表达载体的构建及生物信息学分析

马白荣; 张海森; 高登科; 李超; 靳亚平; 陈华涛

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山羊隐花色素2基因真核表达载体的构建及生物信息学分析

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为了构建山羊隐花色素2(CRY 2)基因的真核表达载体,分析CRY2蛋白的基本特性,本试验采用逆转录PCR扩增山羊CRY 2基因的编码序列(CDS),并以同源重组的方式将其连接至pcDNA3.1-Puro-N-3HA载体,获得pcDNA3.1-3HA-gCRY2重组质粒。酶切和测序鉴定后将重组质粒转染至HEK293T细胞,采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术检测山羊CRY 2基因在mRNA和蛋白水平的表达变化;同时利用生物信息学软件对CRY2蛋白的基本理化性质和功能进行预测和分析。结果显示:pcDNA3.1-3HA-gCRY2重组质粒的酶切和测序结果与预期一致;转染HEK293T细胞后,pcDNA3.1-3HA-gCRY2转染组CRY 2 mRNA的相对表达量比pcDNA3.1-Puro-N-3HA转染组高600倍左右(P<0.001),CRY2蛋白成功表达;山羊、小鼠和人等哺乳动物CRY 2基因CDS区具有较高的相似性;CRY2蛋白不存在信号肽和跨膜区,预测显示其可能与ARNTL、CLOCK、PER1和PER2等蛋白互作。结果表明,本试验成功构建了山羊CRY 2基因的真核表达载体,并预测分析了山羊CRY2蛋白的基本理化特性,为探究山羊CRY 2基因及其编码蛋白的生物学功能提供了科学依据。

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来源
《中国兽医杂志》 |2022年第5期|1-9|共9页
作者
马白荣; 张海森; 高登科; 李超; 靳亚平; 陈华涛;
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作者单位

西北农林科技大学动物医学院;

西北农林科技大学动物医学院农业农村部动物生物技术重点实验室;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类兽医母畜科学、产科学;
关键词
山羊; 隐花色素2; 昼夜节律; 载体构建; 生物信息学;

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