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生物素标记重组猪圆环病毒2d基因型毒株感染性克隆的构建与鉴定

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摘要

本试验旨在获得临床上逐渐增多的猪圆环病毒2d基因型毒株(PCV2d),并对其引入生物素标记。首先从陕西咸阳某临床发病猪场采集了2头发病仔猪和15头未发病仔猪的组织样本,对其进行猪圆环病毒2型(PCV2)检测,并对阳性样本进行测序及序列比对,将获得的PCV2d基因型毒株基因组orf 2中226~246 bp序列替换为生物素受体肽(BAP)编码序列并克隆入质粒载体,同时稳定构建表达原核生物素连接酶(BirA)的PK15细胞系,将替换有BAP的PCV2d基因组酶切并环化后转染稳定表达BirA的PK15细胞,连续盲传5代后鉴定获得的重组病毒。结果显示,检测的组织样本中共有5头仔猪的样本为PCV2阳性,其中1份样本为PCV2d基因型,4份样本为PCV2b基因型;在获得BAP序列替换的PCV2d,构建重组质粒T-PCV2d-BAP和稳定表达BirA的PK15细胞系后,将环化的PCV2d-BAP转染稳定表达BirA的PK15细胞并盲传5代,经PCR和Western blot检测均为PCV2阳性,且能被链酶亲和素识别。本试验成功获得的生物素标记重组PCV2d基因型毒株为后续探究PCV2d基因型毒株免疫逃避机制提供一个非常有效的工具。

著录项

来源
《中国兽医杂志》 |2022年第5期|16-21|共7页
作者
林小枫; 刘梅雪; 袁玮艺; 张琼歌; 朱磊; 杜谦;
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作者单位

西北农林科技大学动物医学院;

杨凌金海生物技术有限公司;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类兽医传染病学;
关键词
猪圆环病毒2型; 原核生物素连接酶-生物素受体肽系统; 基因型; 感染性克隆;

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