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用安德森空气生物采样器采集病毒气溶胶的研究

         
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目的 以表达绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的重组腺病毒(rAdvGFP)为模式病毒,进行气溶胶的主动发生实验和模拟剧烈吹打、振荡混匀等操作,利用安德森采样器进行气溶胶的采集,以建立简单易行的病毒气溶胶采集检测体系.方法 用气溶胶发生器模拟模式病毒的气溶胶主动发生,分别在距离发生器管口0、10和20 cm处放置采样器及培养皿,在气溶胶发生30 s时开始采集,共采集5 min.在模拟吹打操作中,将10 ml病毒液置于50ml离心管中,用微量移液器反复吸取吹打病毒液;在模拟振荡操作中,将10 ml病毒液置于50 ml离心管中盖紧,以振荡器最大速度涡旋振荡1 min,立即打开管盖采集2 min,然后盖紧再重复振荡30 s后开盖继续采集.两种模拟操作均在距离管口0和10cm处放置采样器及培养皿,各采集5 min.收集各采样器及培养皿中的液体,利用阳离子聚合物聚凝胺浓缩后用PCR方法检测病毒核酸,并接种人胚肾293细胞进行病毒的培养,在荧光显微镜下观察GFP蛋白的表达.结果 模拟气溶胶主动发生时,将置于距发生器管口0、10和20 cm的采样器和培养皿中的采集液接种细胞均可观察到绿色荧光,并可检测到病毒核酸.模拟剧烈吹打时,置于0 cm处的培养皿内可检测到病毒,而置于0 cm、10 cm处采样器和10 cm处培养皿中均未检测到病毒.在剧烈振荡模拟试验中,在距离管口0 cm的采样器和培养皿中均可检测到病毒,在置于10 cm处的采样器中未检测到病毒,在置于10 cm处的培养皿中可检测到病毒.结论 利用rAdvGFP模式病毒和安德森采样器初步建立了病毒学实验气溶胶收集检测体系,对模拟危险操作感染性材料所产生的气溶胶做出危险评估,为制定病毒学实验操作规范提供了依据.

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