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从人源全合成抗体库中筛选到抗人干扰素α1b单链抗体

         

摘要

目的 研究开发人源抗huIFN-α的基因工程抗体,为系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)的治疗提供有效的抗体药物.方法 本研究利用噬菌体表面展示技术,以纯化的人干扰素α1b(huIFN-αlb)和人干扰素α2b(huIFN-α2b)蛋白为抗原从人源全合成抗体库中筛选抗huIFN-α的基因工程单链(single chain variable fragment,scFv)抗体,通过phage-ELISA对噬菌体单链抗体的结合特异性和稳定性进行验证.将单链抗体基因克隆到原核分泌表达载体pET22b上在大肠杆菌BL21(DE 3)中表达,通过Westem blot检测单链抗体的分泌表达,并通过ELISA对单链抗体的结合特异性进行验证.通过金属螯合亲和层析纯化单链抗体,并用Western Blot对单链抗体的结合特异性进行鉴定.结果 经过3轮富集筛选,获得100株对huIFN-α1b有特异性结合的噬菌体单链抗体.对得到的86株克隆的测序分析表明,共有9株带有不同的抗体轻重链可变区序列及其组合的抗体,有7株抗体轻重链可变区序列分类在VH3和VL3家族,有2株抗体轻重链可变区序列分类在VH3和VL1家族.获得了5株稳定且特异针对huIFN-α1b而与huIFN-α2b和huIFN-γ无交叉反应的人源单抗.这5株抗体在BL21(DE3)中分泌表达,有3株单链抗体能特异性结合huIFN-α1b而与无关抗原无交叉反应.结论 通过噬菌体表面展示技术,从人源全合成抗体库中筛选得到3株稳定且特异结合huIFN-α1b的人源治疗用基因工程单克隆抗体.

著录项

  • 来源
    《中国医药生物技术》 |2009年第3期|184-189|共6页
  • 作者单位

    100052,北京,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病控制国家重点实验室;

    100052,北京,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病控制国家重点实验室;

    100071,北京,军事医学科学院生物工程研究所;

    100052,北京,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病控制国家重点实验室;

    200025上海,上海交通大学医学院上海免疫学研究所;

    100052,北京,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病控制国家重点实验室;

    100052,北京,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病控制国家重点实验室;

    100052,北京,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病控制国家重点实验室;

    100052,北京,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病控制国家重点实验室;

    100071,北京,军事医学科学院生物工程研究所;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 基础医学;
  • 关键词

    红斑狼疮,系统性; 干扰素Ⅰ型; 抗体,单克隆;

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