力达霉素-胰岛素样生长因子1融合蛋白的构建及其抗非小细胞肺癌活性研究

郭晓芳; 朱小飞; 曹海英; 钟根深; 甄永苏

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目的制备一种由胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor 1,IGF-1)和力达霉素(lidamycin,LDM)构成的融合蛋白,并对其抗非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)活性进行检测。方法合成融合蛋白基因ldp-igf并将其插入到p ET30a载体中,再将获得的重组表达载体p ET30-ldp-igf转化至大肠杆菌中进行诱导表达,得到融合蛋白LDP-IGF。采用细胞免疫荧光实验和基于流式细胞术的亲和实验检测LDP-IGF蛋白与非小细胞肺癌细胞的结合能力;力达霉素的发色团(AE)与LDP-IGF蛋白在体外进行分子组装,获得强化融合蛋白LDP-IGF-AE。四甲基偶氮唑蓝法实验检测LDP-IGF-AE对不同非小细胞肺癌细胞的体外杀伤活性,PI染色结合流式细胞术检测LDP-IGF-AE对细胞周期的影响以及Annexin V-FITC/PI双染法检测LDP-IGF-AE对非小细胞肺癌细胞凋亡的诱导作用。结果经过诱导LDP-IGF蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式表达。采用Ni^(2+)亲和层析技术对包涵体蛋白进行分离纯化,经过变性和分步透析复性后获得了高纯度、有活性的融合蛋白LDP-IGF。亲和实验结果显示,LDP-IGF蛋白与非小细胞肺癌细胞具有高度的亲和力。与AE分子进行组装后获得的强化融合蛋白LDPIGF-AE对不同的非小细胞肺癌细胞系均有非常强烈的杀伤活性,且其杀伤活性显著高于力达霉素。细胞周期阻滞和细胞凋亡实验结果显示,极低浓度的LDP-IGF-AE处理可使非小细胞肺癌细胞阻滞于G_2/M期,并可显著地诱导细胞发生凋亡。结论融合蛋白LDP-IGF-AE对非小细胞肺癌细胞有强大的体外抗肿瘤活性,具有发展成为非小细胞肺癌靶向治疗剂的潜能。

著录项

来源
《中国药学杂志》 |2016年第12期|985-993|共9页
作者
郭晓芳; 朱小飞; 曹海英; 钟根深; 甄永苏;
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作者单位

新乡医学院;

河南新乡453003;

河南省分子诊断与医学检验技术协同创新中心;

河南新乡453003;

新乡医学院第一附属医院;

河南新乡453100;

中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所;

北京100050;

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正文语种 chi
中图分类实验药理学;
关键词
胰岛素样生长因子1; 力达霉素; 融合蛋白; 非小细胞肺癌;

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