重组大鼠长链2-羟酸氧化酶的克隆与表达

苏晨; 余露山; 姚彤炜; 曾苏

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重组大鼠长链2-羟酸氧化酶的克隆与表达

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目的克隆表达大鼠长链2-羟酸氧化酶。方法以鼠肾cDNA为模板,扩增大鼠长链2-羟酸氧化酶基因,连接到pET-28a(+)载体上构建重组质粒pET28a-rHao2,转化表达宿主Rosetta(DE3)。利用IPTG诱导重组蛋白的表达,并通过Ni柱纯化。通过监测DCIP在605 nm处吸光度值的变化来测定其对经典底物的酶动力学参数,验证活性。结果成功构建了表达质粒pET28a-rHao2(β1)和pET28a-rHao2(β2),并诱导表达了大鼠长链2-羟酸氧化酶两种同工酶β1和β2,其对2-羟基辛酸的Km分别为(25.1±1.9)和(24.6±1.2)μmol.L-1;对2-羟基异己酸的Km分别为(24.6±2.3)和(22.4±1.6)μmol.L-1。结论成功克隆表达了大鼠长链2-羟酸氧化酶两种同工酶β1和β2,获得了纯度高,活性好的重组酶,可为其体外底物及抑制剂的筛选提供模型。

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来源
《中国药学杂志》 |2013年第5期|331-336|共6页
作者
苏晨; 余露山; 姚彤炜; 曾苏;
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作者单位

浙江大学药学院药物分析与药物代谢实验室;

杭州310058;

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正文语种 chi
中图分类基因的表达;
关键词
长链2-羟酸氧化酶; 克隆; 表达;

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