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大鼠脑片损伤模型和新型定量评价方法的建立

         

摘要

目的建立不同性质脑损伤实验模型和一种方便、快速、灵敏的定量评价方法.方法制备大鼠皮层和海马脑片,检测活性后,分别接受缺氧缺糖(OGD)、谷氨酸、过氧化氢(H2O2)损伤,氯胺酮、D-AP5、异丙酚预处理,随后与TTC溶液共同孵育,有机溶剂抽提,酶标仪测定OD490值,同时测定孵育上清液乳酸脱氢酶(LDH)释放率.结果室温下恢复孵育90 min后,海马脑片CA1区锥体细胞层可记录到群体峰电位.随着OGD时间延长,皮层和海马脑片TTC染色明显降低,孵育上清液LDH释放率逐渐增加,组织损伤百分率与LDH释放率明显正相关:皮层r=0.960 9, P<0.01; 海马 r=0.892 1, P<0.05.和对照组相比,谷氨酸1 mmol*L-1和H2O2 2 mmol*L-1明显降低脑片TTC染色.氯胺酮5 μmol*L-1、D-AP5 50 μmol*L-1、异丙酚5 μmol*L-1分别抑制OGD 10 min、谷氨酸、H2O2损伤所致脑片TTC染色降低.结论利用大鼠脑片建立的缺氧缺糖、谷氨酸和过氧化氢损伤实验模型,以及新鲜脑片与TTC溶液共同孵育,有机溶剂抽提、比色的定量评价方法具有方便、快速、灵敏的特点,能有效的用于脑缺血损伤和药效评价的研究.

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