重组抗HER2人源化单克隆抗体大规模制备及活性鉴定方法学建立

陈观平; 汪一帆; 应栩华

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目的建立大规模表达重组人源化HER2单克隆抗体(Anti-her2)并测定重组抗体活性的方法.方法利用Anti-her2重链、轻链真核表达载体质粒共同转化CHO细胞,筛选稳定表达株,然后放大培养,并利用Protein A亲和层析柱纯化融合蛋白,SDS-PAGE、HPLC检测产物纯度,Western blot检测产物特异性,同时比较重组抗体的活性.结果筛选得到1株稳定表达的细胞株,收液后蛋白BCA定量为135.9 mg·L-1.纯化后获得的目的蛋白相对分子质量约为185 kD,蛋白纯度在99％以上,与商品化的"赫赛汀"一致;活性检测显示其活性与"赫赛汀"相当,细胞实验揭示其能显著抑制BT-474细胞增殖及胞内HER2的表达.结论该方法筛选获得的重组蛋白,与商品化药物性质基本一致,这为重组抗体药物的大规模悬浮培养放大和工业化生产奠定了基础.

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来源
《中国药理学通报》 |2021年第6期|884-888|共5页
作者
陈观平; 汪一帆; 应栩华;
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作者单位

浙江省立同德医院中西医结合肿瘤研究所浙江杭州 310012;

浙江省立同德医院中西医结合肿瘤研究所浙江杭州 310012;

浙江省立同德医院中西医结合肿瘤研究所浙江杭州 310012;

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正文语种 chi
中图分类医用实验动物学;免疫分子生物学（免疫化学）;乳腺肿瘤;
关键词
重组; HER2; 人源化; 单克隆抗体; 中国仓鼠卵巢细胞; 纯化;

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