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人脐带间充质干细胞来源外泌体增强心脏肌成纤维细胞血管形成作用

         

摘要

目的探究人脐带间充质干细胞人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hucMSC)来源外泌体(exosomes)对心脏肌成纤维细胞促血管形成作用。方法通过流式细胞术检测hucMSC相关表面标记。透射电子显微镜、Nanosight纳米颗粒分析仪和Western blot鉴定exosomes。采用CCK-8细胞增殖实验、Transwell实验、细胞划痕以及内皮细胞小管形成实验检测exosomes作用后心脏肌成纤维细胞对内皮细胞增殖、迁移和小管形成能力影响。实时荧光定量PCR等技术检测对照组和exosomes作用组心脏肌成纤维细胞VEGF-A水平,进一步加入β-catenin/TCF介导的转录抑制剂后,检测VEGF-A表达水平。结果hucMSC不表达CD19、CD34和CD45,而高表达CD29、CD105和CD90,与间充质干细胞特性相符。经鉴定其exosomes粒径约100~200 nm,相较hucMSC,exosomes高表达CD81,低表达GAPDH,不表达内质网特异性分子Calnexin,这些均与exosomes特征相符。免疫荧光细胞化学染色发现心脏肌成纤维细胞高表达α-SMA,exosomes作用后心脏肌成纤维细胞促进内皮细胞增殖、迁移和小管形成能力。进一步检测发现exosomes作用后心脏肌成纤维细胞VEGF-A水平增加,加入β-catenin/TCF介导的转录抑制剂后,VEGF-A表达水平降低。结论hucMSC来源exosomes增强心脏肌成纤维细胞血管形成作用。

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