目的建立一种快速简便的巢式聚合酶链式反应（PCR）法，以检测乳腺癌外周血循环癌细胞高表达基因角蛋白19（KRT19）。方法通过设计退火温度分别为72℃和60℃的内、外侧2对引物，在一个PCR反应体系中，同时加入0．2μmol/L外侧引物和20μmol/L内侧引物，使2轮PCR扩增反应一步完成。分别用建立的巢式PCR法与传统巢式PCR法检测30例乳腺癌患者和10例健康人外周血KRT19基因表达，比较其特异性；将肿瘤细胞系列稀释后分析两法的敏感性。结果建立的巢式PCR新方法与传统巢式PCR法在40份标本中均检出16份阳性，并都能检测到106稀释度中的肿瘤细胞，两法特异性和敏感性相同。建立的巢式PCR法所需的时间缩短了27 min ，且步骤简便。结论建立的巢式PCR法敏感、特异，且快速、简便，适用于临床快速检测。
展开▼
