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棉花纤维素合酶基因GhcelA1克隆及其载体构建

         

摘要

根据GeneBank 中GhcelA1(U58283)序列,利用RT-PCR技术,从棉纤维中克隆到GhcelA1 cDNA全长.运用基因重组技术,构建pCAM2300-35S-GhcelA1过表达载体;融合基因表达载体pCAM2300-35S-GhcelA1-EGFP,以及pCAM2300-35S-GhcelA1-RNAi载体,这些载体均通过限制性酶切鉴定和测序验证.农杆菌介导法将融合基因转化棉花子叶,通过激光共聚焦荧光显微镜,在蓝色激发光下观察诱导的愈伤,发现在转化的活体细胞核与质膜内侧有绿色荧光,说明融合基因载体EGFP构建正确,可以在棉花中正常表达.所构建的系列载体可用于转化棉花,促进纤维素在棉纤维中合成与积累.

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