屎肠球菌ORF5基因缺失株的构建及鉴定

熊建英; 韩泽平; 陈武嘉; 肖钘; 杨晓燕

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屎肠球菌ORF5基因缺失株的构建及鉴定

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目的构建屎肠球菌ORF5基因缺失株,证实其可能是屎肠球菌感染中较为重要的致病因子,为屎肠球菌的预防和治疗提供理论依据。方法通过重叠延伸PCR技术将ORF5基因上游同源臂、卡纳霉素基因、下游同源臂连接成一个片段,克隆入自杀质粒PCVD442,将重组质粒电转化入屎肠球菌中,通过卡纳霉素以及菌落PCR筛选得到ORF5基因缺失株,进行PCR以及测序鉴定;比较突变株与野生株体外生存能力以及对膀胱癌细胞的粘附率。结果利用重叠延伸PCR技术将ORF5基因上游同源臂、卡纳霉素基因、下游同源臂连接成一个片段,并连接至PCVD442自杀质粒;重组自杀质粒进入屎肠球菌后出现了同源重组事件,ORF5基因被卡纳霉素基因替代,通过PCR及测序分析证实基因组ORF5基因已敲除;通过细胞培养证实野生株对膀胱癌细胞的粘附率高于突变株。结论成功构建屎肠球菌ORF5基因突变株,突变株黏附膀胱癌细胞能力减弱,初步证实ORF5基因与屎肠球菌的致病力有关。

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来源
《中华医院感染学杂志》 |2016年第21期|4869-4872|共4页
作者
熊建英; 韩泽平; 陈武嘉; 肖钘; 杨晓燕;
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作者单位

广州市番禺区中心医院检验科;

广东广州511400;

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正文语种 chi
中图分类病原细菌;
关键词
屎肠球菌; ORF5; 基因缺失; 自杀质粒;

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