首页> 中文期刊> 《中国预防医学杂志》 >细粒棘球蚴重组蛋白HIS-CTLA-4IgV-EgG1Y162的诱导表达及3D结构预测

细粒棘球蚴重组蛋白HIS-CTLA-4IgV-EgG1Y162的诱导表达及3D结构预测

         

摘要

目的探索重组蛋白HIS-CTLA-4IgV-EgG1Y162最佳的表达条件,大量诱导及鉴定蛋白质,并预测重组蛋白质的三维结构模型。方法将原核重组质粒pET30a-CTLA-4IgV-EgG1Y162转化至E.coli.BL21(DE)菌株中,在不同条件下诱导重组蛋白进行表达,SDS-PAGE分析上清及沉淀中重组蛋白表达并用Western blot鉴定。I-TASSER在线预测重组蛋白HIS-CTLA-4IgV-EgG1Y162的三维结构。结果可溶性重组蛋白HIS-CTLA-4IgV-EgG1Y162在异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-Thiogalactoside,IPTG)(终浓度0.2 mmol/L),28℃4 h诱导条件下表达量较高;包涵体中的重组蛋白在IPTG(终浓度0.8 mmol/L),28℃2 h并37℃2 h诱导条件下表达量最高。Western blot鉴定该蛋白的相对分子量约为32×10^(3),与预期相符。利用I-TASSER在线预测重组蛋白质HIS-CTLA-4IgV-EgG1Y162的3D结构模型,结果显示相邻的蛋白CTLA-4IgV与蛋白EgG1Y162能抵抗空间位阻的影响进行正常折叠。结论探索出重组蛋白HIS-CTLA-4IgV-EgG1Y162的最佳诱导表达条件并对重组蛋白成功鉴定,根据预测的重组蛋白3D结构验证选用linker序列"GTDDDDKAMADIGSEF"能使其前后相邻的两个蛋白独立正常折叠,为进一步深入研究细粒棘球蚴重组疫苗创造了条件。

著录项

相似文献

  • 中文文献
  • 外文文献
  • 专利
获取原文

客服邮箱:kefu@zhangqiaokeyan.com

京公网安备:11010802029741号 ICP备案号:京ICP备15016152号-6 六维联合信息科技 (北京) 有限公司©版权所有
  • 客服微信

  • 服务号